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Molekulargewicht:
476,86 MLN8054 ist ein potenter und selektiver Inhibitor von Aurora A mit einem IC50 von 4 nM. Es ist für Aurora A mehr als 40-fach selektiver als für Aurora B. Phase 1.
Biologische Aktivität MLN8054 ist ein ATP-kompetitiver, reversibler Inhibitor der rekombinanten Aurora A-Kinase mit einer IC50 von 4 nM, die >40-fach mehr zeigt selektive Hemmaktivität für Aurora A im Vergleich zu Aurora B. In vitro zeigt MLN8054 die Aktivität der Wachstumshemmung bei verschiedenen Zelllinien aus unterschiedlichen Gewebeherkünften mit IC50-Werten im Bereich von 0,11 μM bis 1,43 μM. Darüber hinaus hemmt MLN8054 in kultivierten Zellen selektiv Aurora A gegenüber Aurora B und hemmt die Zellproliferation, indem es die G2/M-Akkumulation und Spindeldefekte in mehreren kultivierten humanen Tumorzelllinien fördert. Eine aktuelle Studie zeigt, dass MLN8054 androgenresistenten Prostatakrebs gegenüber Strahlung sensibilisiert, indem es die Aurora-A-Kinase hemmt, die mit anhaltenden DNA-Doppelstrangbrüchen in Verbindung gebracht wird. Bei den HCT-116-Tumor-tragenden Mäusen führt MLN8054 bei oraler Verabreichung von 3 mg/kg, 10 mg/kg und 30 mg/kg einmal täglich zu einer dosisabhängigen Hemmung des Tumorwachstums (TGI: 76 % und 84 % für 10 mg/kg und 30 mg/kg). MLN8054 zeigt auch eine ähnliche Antitumoraktivität im PC-3-Tumor-Xenotransplantat in Nacktmäusen. Bei den HCT-116-Xenotransplantat-tragenden Tieren induziert MLN8054 eine DNA- und Tubulin-Färbung von Tumorgewebe im Kern- und Zellkörperbereich, was einem seneszenten Phänotyp entspricht, indem es die seneszenzassoziierte Beta-Galactosidase-Aktivität erhöht.
Enzymassays Rekombinantes murines Aurora A- und Aurora B-Protein wird in Sf9-Zellen exprimiert und mit GST-Affinitätschromatographie gereinigt. Das Peptidsubstrat für Aurora A ist mit Biotin (Biotin-GLRRASLG) konjugiert. Aurora A-Kinase (5 nM) wird in 50 mM Hepes (pH 7,5)/10 mM MgCl2/5 mM DTT/0,05% Tween 20/2 µM Peptidsubstrat/3,3 µCi/ml [γ-33P]ATP bei 2 µM x . getestet mit Image FlashPlates. Aurora B-Kinase (2 nM) wird mit 10 µM biotinyliertem Peptid Biotin-TKQTARKSTGGKAPR in 50 mM Tricin (pH 8,0)/2,5 mM MgCl2/5 mM DTT/10 % Glycerin/2 % BSA/40 µCi/ml [γ-33P ]ATP bei 250 μM. Die Bedingungen für alle anderen In-vitro-Kinase-Assays sind auf Anfrage erhältlich. MLN8054 wird in einem 226-Kinase-Screen bei einer Konzentration der Verbindung von 1 &mgr;M mit einer ATP-Konzentration von 10 &mgr;M für alle Assays durchgeführt.
Methode Humane Tumorzelllinien werden gemäß den Empfehlungen des Händlers in 96-Well-Zellkulturschalen gezüchtet. MLN8054, verdünnt in DMSO, wird den Zellen in zweifachen Reihenverdünnungen zugesetzt, um Endkonzentrationen im Bereich von 10 mM bis 0,04 mM zu erreichen. MLN8054 wird bei jeder Verdünnung dreifach mit jedem Replikat auf einer separaten Platte zugegeben. Als unbehandelte Kontrolle dienen mit DMSO behandelte Zellen (n = 6 Wells pro Platte; 0,2% Endkonzentration). Die Zellen werden 96 Stunden bei 37 °C in einer befeuchteten Zellkulturkammer mit MLN8054 behandelt. Die Lebensfähigkeit der Zellen in jeder Zelllinie wird mit dem Cell Proliferation ELISA, dem kolorimetrischen Kit BrdU gemäß den Empfehlungen des Herstellers gemessen
Produktgruppe : Epigenetik > Aurora-Kinase-Inhibitor
