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Molekulargewicht:
513,59 ZM 447439 ist ein selektiver und ATP-kompetitiver Inhibitor für Aurora A und Aurora B mit IC50 von 110 nM bzw. 130 nM. Es ist mehr als 8-fach selektiv für Aurora A/B als MEK1, Src, Lck und hat eine geringe Wirkung gegen CDK1/2/4, Plk1, Chk1 usw.
Biologische Aktivität In vitro hemmt ZM-447439 selektiv rekombinante humane Aurora A und B mit IC50-Werten von 110 bzw. 130 nM, während andere Proteinkinasen unterschiedlicher Strukturtypen einschließlich der mitotischen Kinasen CDK1 und PLK1 mit IC50-Werten >10 µM gehemmt werden. Aurora-Kinase-Inhibitor, ZM-447439 hemmt zeit- und dosisabhängig das Wachstum aller drei Zelllinien mit IC50-Werten von 3 μM (BON), 0,9 μM (QGP-1) und 3 μM (MIP-101) nach 72 Stunden kontinuierliche Belichtung. Darüber hinaus induziert ZM-447439 wirksam die Zellapoptose, indem es die DNA-Fragmentierung und die Aktivierung von Caspase 3 und 7 fördert, und stoppt GEP-NET-Zellen in der G0 /G1- und G2/M-Phase des Zellzyklus. Im Mausembryo führt die Hemmung der Aurora-Kinase-Aktivität durch ZM-447439 zu Anomalien während der Mitose, indem die Phosphorylierung von Histon H3 Serin 10 (H3S10Ph) von G2 in die Metaphase mit unterschiedlichen Störungen in jedem Embryonalzyklus reguliert wird. Eine kürzlich durchgeführte Studie zeigt, dass ZM-447439 eine wachstumshemmende und proapoptotische Wirkung auf SiHa-Zellen von Gebärmutterhalskrebs zeigt und die Chemosensitivität gegenüber Cisplatin erhöht.
In-vitro-Kinase-Assays Rekombinante Aurora A und B werden als NH2-terminale His6-markierte Fusionsproteine unter Verwendung eines Baculovirus-Expressionssystems exprimiert. Aurora A wird durch Affinitätschromatographie unter Verwendung von Ni-NTA-Agarose gereinigt und Aurora B wird durch Ionenaustauschchromatographie unter Verwendung von CM Sepharose Fast Flow gereinigt. 1 ng gereinigtes rekombinantes Enzym wird einem Reaktionscocktail zugesetzt, der 25 mM Tris-HCl, pH 7,5, 12,5 mM KCl, 2,5 mM NaF, 0,6 mM DTT, 6,25 mM MnCl2, 10 µM Peptidsubstrat, 10 µM für Aurora A oder 5 µM . enthält ATP für Aurora B und 0,2 µCi -[33P]ATP (spezifische Aktivität ≥2.500 Ci/mmol) und wird dann 60 Minuten bei RT inkubiert. Die Reaktionen werden durch Zugabe von 20 % Phosphorsäure gestoppt, und die Produkte werden auf P30-Nitrozellulosefiltern aufgefangen und auf den Einbau von 33P mit einem BetaplateTM-Zähler untersucht. Es werden keine Enzym- und keine Verbindungskontrollwerte verwendet, um die Konzentration von ZM447439 zu bestimmen, die eine 50%ige Hemmung der Enzymaktivität ergab. Weitere Details sind auf Anfrage bei Nicholas Keen erhältlich. Methode Die Zellzahl wird durch Kristallviolett-Färbung bewertet. Kurz gesagt, Zellen in 96-Well-Platten werden mit 1% Glutaraldehyd fixiert. Dann werden die Zellen mit 0,1% Kristallviolett gefärbt. Der ungebundene Farbstoff wird durch Waschen mit Wasser entfernt. Gebundenes Kristallviolett wird mit 0,2% Triton X-100 solubilisiert. Die linear mit der Zellzahl ansteigende Lichtextinktion wird bei 570 nm mit einem ELISA-Reader analysiert.
Produktgruppe : Epigenetik > Aurora-Kinase-Inhibitor
