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Molekulargewicht:
474,48 PF-03814735 ist ein neuartiger, potenter und reversibler Inhibitor von Aurora A/B mit einer IC50 von 0,8 nM/5 nM, weniger potent gegenüber Flt3, FAK, TrkA, und minimal aktiv gegenüber Met und FGFR1. Phase 1.
Biologische Aktivität In intakten Zellen reduziert die inhibitorische Aktivität von PF-03814735 auf die Kinasen Aurora1 und Aurora2 die Spiegel von Phospho-Aurora1 (Thr 232, ein sensitiver Marker der Aurora1-Aktivität, mit IC50 ~ 20 nM), Phosphohiston H3 (mit IC50 ~ 50 nM) und Phospho-Aurora2 (mit IC50 ~150 nM). PF-03814735 bewirkt eine Blockierung der Zytokinese, was zu einer Hemmung der Zellproliferation und der Bildung polyploider mehrkerniger Zellen führt. Eine neuere Forschung zeigt, dass kleinzelliger Lungenkrebs (SCLC) und in geringerem Maße Dickdarmkrebslinien sehr empfindlich auf PF-03814735 reagieren. Der Status der Myc-Genfamilie und der Mitglieder des Retinoblastom-Signalwegs korreliert signifikant mit der Wirksamkeit von PF-03814735. Eine einmal tägliche orale Dosierung von ≥ 20 mg/kg PF-03814735 für 10 Tage an Mäuse, die HCT-116-Xenotransplantate trugen, führte zu einer statistisch signifikanten und dosisabhängigen Hemmung des Tumorwachstums von ≥ 50 % im Vergleich zu mit Vehikel behandelten Mäusen. Die Hemmung ist mit einer Verringerung der phosphorylierten Histon-H3-Spiegel verbunden. Bei fünf weiteren Xenotransplantat-Tumormodellen, einschließlich A2780 Ovarialkarzinom, MDA-MB-231 Mammakarzinom, Kolo-205 und SW620 kolorektalen Karzinomen und HL-60 akuter Promyelozytärer Leukämie, wird eine signifikante Antitumor-Wirksamkeit als Einzelwirkstoff beobachtet. In-vivo-Experimente mit zwei SCLC-Xenotransplantatmodellen bestätigen die Sensitivität von Myc-gengetriebenen Modellen gegenüber PF-03814735 und eine mögliche Zeitplanabhängigkeit von MYC/c-Myc-getriebenen Tumoren.
Rekombinante Kinase-Assays Aurora1- und Aurora2-Proteine werden als rekombinante His-Tag-Proteine voller Länge produziert, die in Insektenzellen exprimiert werden. Für den Aurora2-Kinase-Assay wird die Phosphorylierung des Substratpeptids durch das rekombinante Aurora2-Protein durch einen Z'-LYTE-Assay bei 3 bis 300 µM ATP und verschiedenen Konzentrationen von PF-03814735 über 60 Minuten bei einer Substratpeptidkonzentration von 2 µM ( biotinyliertes LRRWSLG, ×4). Die Phosphorylierung ist über diese Zeit für alle Bedingungen linear. Für den Aurora1-Kinase-Assay wird die Phosphorylierung des Substratpeptids durch das rekombinante Aurora1-Protein durch einen Szintillations-Proximity-Assay in einem 96-Well-Plattenformat bestimmt, bei dem der Einbau von 33P in das Peptidsubstrat (biotinyliertes LRRWSLG, ×4) durch Einfangen gemessen wird das Peptid auf einem Streptavidin-Szintillations-Proximity-Assay-Bead. Methode Zelllinien werden in geeigneten Medien gezüchtet und nach 48-stündiger Exposition gegenüber entweder PF-03814735 oder Vehikel ausgewertet, gefolgt von der Bestimmung der Zellzahl in einem Coulter Counter. Die Proliferation (gemessen durch eine Zunahme der Zellzahl) wird als Prozentsatz der unbehandelten Kontrollen ausgedrückt. Um die für die antiproliferative Aktivität erforderliche PF-03814735-Expositionszeit zu bewerten, werden HL-60-Zellkulturen in RPMI-Medium, ergänzt mit 15% hitzeinaktiviertem fötalem Rinderserum, kultiviert und verschiedenen PF-03814735-Konzentrationen für 4, 8, 12, 24, und 48 Stunden, gefolgt von einem Auswaschschritt und Inkubation mit Wachstumsmedium ohne PF-03814735 für den Rest des 72-stündigen Testzeitraums. Die kontinuierliche Exposition gegenüber PF-03814735 für 72 Stunden wird ebenfalls bewertet. Die Zellzahlen werden durch einen Coulter Counter bestimmt.
Produktgruppe : Epigenetik > Aurora-Kinase-Inhibitor
