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Molekulargewicht:
498,64 Masitinib ist ein neuartiger Inhibitor für Kit und PDGFRα/β mit IC50 von 200 nM und 540 nM/800 nM, schwache Hemmung von ABL und c-Fms. Phase 3.
Biologische Aktivität Masitinib ist ein kompetitiver Inhibitor gegen ATP in Konzentrationen ≤500 nM. Masitinib hemmt auch rekombinante PDGFR und die intrazelluläre Kinase Lyn und in geringerem Maße den Fibroblasten-Wachstumsfaktor-Rezeptor 3. Im Gegensatz dazu zeigt Masitinib eine schwache Hemmung von Abl und c-Fms. Masitinib hemmt die Degranulation, die Zytokinproduktion und die Mastzellmigration im Knochenmark stärker als Imatinib. In Ba/F3-Zellen, die Human-Wildtyp-Kit exprimieren, hemmt Masitinib die SCF (Stammzellfaktor)-induzierte Zellproliferation mit einer IC50 von 150 nM, während die IC50 für die Hemmung der IL-3-stimulierten Proliferation bei etwa >10 µM liegt. In Ba/F3-Zellen, die PDGFRα exprimieren, hemmt Masitinib die PDGF-BB-stimulierte Proliferation und die PDGFRα-Tyrosinphosphorylierung mit einer IC50 von 300 nM. Masitinib bewirkt auch eine Hemmung der SCF-stimulierten Tyrosin-Phosphorylierung von humanem Kit in Mastozytom-Zelllinien und BMMC. Masitinib hemmt Kit-Gain-of-Function-Mutanten, einschließlich V559D-Mutante und Δ27-Mausmutante mit IC50 von 3 und 5 nM in Ba/F3-Zellen. Masitinib hemmt die Zellproliferation von Mastozytom-Zelllinien einschließlich HMC-1α155 und FMA3 mit IC50 von 10 bzw. 30 nM. Masitinib hemmt das Zellwachstum und die PDGFR-Phosphorylierung in zwei neuartigen ISS-Zelllinien, was darauf hindeutet, dass Masitinib sowohl gegen primäre als auch gegen metastasierende ISS-Zelllinien wirksam ist und bei der klinischen Behandlung von ISS helfen kann. Masitinib hemmt das Tumorwachstum und erhöht die mediane Überlebenszeit in Δ27-exprimierenden Ba/F3-Tumormodellen bei 30 mg/kg ohne Kardiotoxizität oder Genotoxizität. Masitinib (12,5 mg/kg/Tag p.o.) erhöht die Gesamt-TTP (Zeit bis zur Tumorprogression) im Vergleich zu Placebo bei Hunden. Die Kombination von Masitinib/Gemcitabin zeigt in vitro Synergien bei der Proliferation der Gemcitabin-refraktären Zelllinien Mia Paca2 und Panc1 und in geringerem Maße bei Mia Paca-2-Pankreastumoren bei Nog-CID-Mäusen.
Enzymgebundener In-vitro-Immunoassay mit rekombinanten Proteinkinasen Eine 96-Well-Mikrotiterplatte wird über Nacht mit 0,25 mg/ml Poly(Glu,Tyr 4:1) beschichtet, zweimal mit 250 µL Waschpuffer (10 mM Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung) gespült [pH 7,4] und 0,05 % Tween 20) und 2 Stunden bei Raumtemperatur getrocknet. Die Assays werden bei Raumtemperatur mit einem Endvolumen von 50 µl in Kinasepuffer (10 mM MgCl2, 1 mM MnCl2, 1 mM Natriumorthovanadat, 20 mM HEPES, pH 7,8) mit ATP in einer Konzentration von mindestens dem doppelten Km für jeden durchgeführt Enzym und eine geeignete Menge an rekombinantem Enzym, um eine lineare Reaktionsgeschwindigkeit sicherzustellen. Reaktionen werden nach Einführung des Enzyms initiiert und durch Zugabe eines Reaktionsvolumens (50 &mgr;l) 100 mM EDTA pro 5 M Harnstoffmischung beendet. Die Platten werden dreimal gewaschen und mit 1:30.000 Meerrettichperoxidase-konjugiertem monoklonalen Anti-Phosphotyrosin-Antikörper inkubiert, dann dreimal gewaschen und mit Tetramethylbenzidin inkubiert. Das Endreaktionsprodukt wird durch Spektrophotometrie bei 450 nm quantifiziert. Methode Für den Assay der Ba/F3-Zellproliferation werden Mikrotiterplatten mit insgesamt 104 Zellen/Well in 100 μL RPMI 1640-Medium mit 10 % fötalem Rinderserum bei 37 °C ausgesät. Diese werden entweder mit 0,1% konditioniertem Medium aus X63-IL-3-Zellen oder 250 ng/ml murinem SCF ergänzt oder nicht. Der Maus-SCF, der das Kit aktiviert, wird aus dem konditionierten Medium von SCF-produzierenden CHO-Zellen gereinigt. Die Zellen werden 48 Stunden bei 37 °C mit Masitinib gezüchtet und dann mit 10 μl/Well WST-1-Reagenz 3 Stunden bei 37 °C inkubiert. Die Menge des gebildeten Formazanfarbstoffs wird durch seine Absorption bei 450 nm unter Verwendung eines Scanning-Multiwell-Spektrophotometers quantifiziert. Als Hintergrundkontrolle für das Spektrophotometer wird eine leere Vertiefung ohne Zellen verwendet.
Produktgruppe : Protein Tyrosinkinase > c-Kit-Inhibitor
