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Molekulargewicht:
438,3 P276-00 ist ein neuartiger CDK1-, CDK4- und CDK9-Inhibitor mit IC50 von 79 nM, 63 nM bzw. 20 nM. Phase 2/3.
Biologische Aktivität P276-00 zeigt eine 40-fache Selektivität gegenüber Cdk4-D1, verglichen mit Cdk2-E[1]. Es zeigt starke antiproliferative Wirkungen gegen verschiedene menschliche Krebszelllinien, einschließlich HCT-116, U2OS, H-460, HL-60, HT-29, SiHa, MCF-7, Colo-205, SW-480, PC-3, Caco2 , T-24 mit einer IC50 im Bereich von 300 bis 800 nmol/l und erwies sich im Vergleich zu normalen Fibroblastenzellen als hochselektiv für Krebszellen. P276-00 kann Cyclin D1 und Cdk4 auf ATP-kompetitive Weise herunterregulieren und die Cdk4-spezifische pRb-Ser780-Phosphorylierung verringern. P276-00 induziert auch Apoptose, indem es die zelluläre Caspase-3-Aktivität und die DNA-Leiterbildung beeinflusst. P276-00, ip mit 50 mg/kg täglich für 20 Behandlungen verabreicht, kann eine signifikante Wachstumshemmung von murinem Dickdarmkrebs (CA-51) induzieren. Jedoch zeigt im Maus-Lungenkarzinom-Modell (Lewis-Lunge) eine erhöhte Dosis von 60 mg/kg (30 mg/kg zweimal täglich), die jeden zweiten Tag ip für 7 Behandlungen verabreicht wird, eine signifikante Hemmung des Wachstums. Und es hemmt auch das Wachstum von humanem Kolonkarzinom HCT-116 Xenotransplantat und humanem nicht-kleinzelligem Lungenkarzinom H-460 Xenotransplantat. Wirksamkeitsstudien haben gezeigt, dass die maximal verträgliche Dosis 78 mg/kg/Tag beträgt. Protokoll (nur als Referenz) Kinase-Assay: [1]
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Cdk4-D1/Cdk2-E enzyme assay
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The Cdk4-D1/Cdk2-E enzyme assay is run in 96-well format using Millipore Multiscreen filtration plates. All assay steps are done in a single filter plate. The filtration wells are prewetted with 100 μL of kinase buffer [50 mmol/L HEPES (pH, 7.5), 10 mmol/L MgCl2, 1 mmol/L EGTA], and then the solution is removed by vacuum. With filter plate on vacuum manifold, 50 μL GST-Rb bound to GSH-Sepharose beads in kinase buffer (0.5 μg GST-Rb/50 μL) is added to each well, and vacuum is applied to the filter plate. About 25 μL of a reaction mix containing ATP (cold + hot) and 4× phosphatase inhibitor mix (40 μmol/L unlabeled ATP, 10 μCi/mL γ32P-ATP, 40 mmol/L h-glycerophosphate, 4 mmol/L DTT, 0.4 mmol/L NaF, 0.4 mmol/L sodium orthovanadate)
diluted in kinase buffer is added to each well. The test compound (4×final concentration in kinase buffer) or kinase buffer alone (control) is then added in an additional 25 μL volume. To each well, 50 μL (100 ng) of human Cdk4-D1/Cdk2-E enzyme in kinase buffer is added to initiate the reaction, which is allowed to continue for 30 min at 30°C.
When the reaction is completed, vacuum is applied again, and the plate is washed with the TNEN buffer [20 mmol/L Tris (pH, 8.0), 100 mmol/L NaCl, 1 mmol/L EDTA, 0.5% nonidet-P40] thrice; the filter plate is air-dried and is placed in a Multiscreen adapter plate. Packard Microscint-O cocktail (30 μL) is added, and the plate is covered with a Top-Seal A film. Quantitation of 32P-GST-Rb in 96-well filter plates is carried out by Top Count scintillation counter. All compounds are tested initially at 1 μmol/L concentration. Compounds showing more than or equal to 50% inhibition are further profiled for IC50 determination.
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Zellassay: [1]
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Cell lines
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HCT-116, U2OS, H-460, HL-60, HT-29, SiHa, MCF-7, Colo-205, SW-480, PC-3, Caco2, T-24
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Concentrations
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~5.0 μM
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Incubation Time
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48 h
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Method
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The cells are seeded at a density of 3,000-5,000 cells per well, depending on cell type in 180 μL of culture medium in 96-well plate and incubated overnight to allow the cells to adhere. Varying concentrations of compounds are added to the wells and incubated for 48 h at 37°C. 3H-thymidine (0.25 μCi) is added to each well, and incorporation of the radiolabel is allowed to proceed for
5 to 7 h. Following this incubation, cells are harvested onto GF/B unifilter plates using a Packard Filtermate Universal harvester, and the plates are counted in a Packard Top Count 96-well liquid scintillation counter.
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Tierstudie: [2]
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Animal Models
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H-460 xenograft
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Formulation
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water
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Dosages
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50 mg/kg once daily or 30 mg/kg twice daily
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Administration
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i.p.
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Solubility
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30% propylene glycol, 5% Tween 80, 65% D5W,
30 mg/mL
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* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Umrechnung verschiedener Modelltiere basierend auf BSA (Wert basierend auf Daten aus FDA Draft Guidelines)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
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0.025
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0.02
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0.007
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Km factor
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20
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20
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12
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12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Um beispielsweise die Resveratrol-Dosis für eine Maus (22,4 mg/kg) auf eine Dosis basierend auf dem BSA für eine Ratte zu ändern, multiplizieren Sie 22,4 mg/kg mit dem Km-Faktor für eine Maus und dividieren Sie dann durch den Km-Faktor für eine Ratte. Diese Berechnung ergibt eine Ratten-Äquivalentdosis für Resveratrol von 11,2 mg/kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Chemische Informationen
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Molecular Weight (MW)
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438.3
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Formula
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C21H20ClNO5.HCl
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CAS No.
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920113-03-7
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Storage
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3 years -20℃Powder
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6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
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Synonyms
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Solubility (25°C) *
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In vitro
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DMSO
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88 mg/mL
(200.77 mM)
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Water
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88 mg/mL
(200.77 mM)
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Ethanol
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7 mg/mL
(15.97 mM)
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In vivo
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30% propylene glycol, 5% Tween 80, 65% D5W
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30 mg/mL
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* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Chemical Name
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4H-1-Benzopyran-4-one, 2-(2-chlorophenyl)-5,7-dihydroxy-8-[(2R,3S)-2-(hydroxymethyl)-1-methyl-3-pyrrolidinyl]-, hydrochloride (1:1)
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Molaritätsrechner Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner
Produktgruppe : Zellzyklus > CDK-Inhibitor
