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Molekulargewicht:
213,24 PHA-767491 ist ein potenter ATP-kompetitiver dualer Cdc7/CDK9-Inhibitor mit IC50 von 10 nM bzw. 34 nM. Es zeigt eine ~20-fache Selektivität gegenüber CDK1 /2 und GSK3-β, 50-fache Selektivität gegenüber MK2 und CDK5, 100-fache Selektivität gegenüber PLK1 und CHK2.
Biologische Aktivität PHA-767491 zeigt etwa 20-fache Selektivität für Cdk1, Cdk2 und GSK3-β, 50-fach Selektivität für MK2 und Cdk5 und 100-fache Selektivität für PLK1 und CHK2. PHA-767491 hemmt die Zellproliferation in einer Vielzahl menschlicher Zelllinien mit IC50 von 0,86 µM für SF-268 bis 5,87 µM für K562 und induziert signifikant p53-unabhängig Apoptose in fast allen Zelllinien im Gegensatz zu 5-FU oder Gemcitabin, das nur in wenigen Zelllinien wirkt. Im Gegensatz zu aktuellen DNA-Synthese-Inhibitoren blockiert die Behandlung mit PHA-767491 bei 5 μM die Initiation der DNA-Replikation, aber nicht die Progression der Replikationsgabel aufgrund der spezifischen Hemmung der Cdc7-Kinase und der Mcm2-Phosphorylierung an der Cdc7-abhängigen Ser40-Stelle. Die hochregulierten Mcl-1-Spiegel in ABT-737-resistenten OCI-LY1- und SU-DHL-4-Zellen können durch eine PHA-767491-Behandlung mit 3 μM möglicherweise aufgrund der Hemmung von Cdk9 signifikant gesenkt werden, was zur Wiederherstellung des Empfindlichkeit gegenüber ABT-737. Die direkte mitochondriale abhängige Pro-Apoptose-Wirkung von PHA-767491 wird auch bei Anwendung von 1 µM in ruhenden Zellen der chronischen lymphatischen Leukämie (CLL) durch den ähnlichen Mechanismus mit EC50 von 0,34-0,97 µM beobachtet. Während in proliferierenden CLL-Zellen, die durch CD154 und Interleukin-4 stimuliert werden, die Behandlung mit PHA-767491 bei 5 &mgr;M die DNA-Synthese aufhebt, indem sie Cdc7 hemmt, anstatt den Zelltod auszulösen. Die Verabreichung von PHA-767491 zweimal täglich über 5 Tage hemmt das Wachstum von HL60-Xenotransplantat in einer dosisabhängigen Weise mit einem TGI von 50 % bzw. 92 % bei einer Dosis von 20 mg/kg bzw. 30 mg/kg, die Wirkung von die auch in A2780-, Mx-1- und HCT-116-Xenotransplantatmodellen sowie den DMBA-induzierten Mammakarzinomen markiert ist und mit der Cdc7-Hemmung und anschließenden verminderten Phosphorylierung von Mcm2 an der Cdc7-abhängigen Stelle korreliert Ser40-Protokoll (nur als Referenz) ) Kinase-Assay: [1]
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In vitro kinase assays
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The inhibition of Cdc7 and Cdk9 by PHA-767491 (IC50) is determined using the strong anion exchanger (Dowex 1-X8 resin, formate form)-based assay. For each enzyme, the absolute Km values for ATP and the specific substrate are initially determined, and each assay is then run at optimized ATP/33P-γ-ATP mix (2Km) and substrate (5Km) concentrations. Cdc7 kinase assay is performed in a buffer containing 50 mM Hepes pH 7.9, 15 mM MgCl2, 2 mM β- glycerylphosphate, 0.2 mg/mL BSA, 1 mM DTT, 3 μM Na3VO4, 2Km ATP/33P-γ-ATP mix, 5Km Mcm2 (aa 10-294), 37 nM of recombinant Cdc7/Dbf4 and increasing concentration of PHA-767491 in a final volume of 30 μL, and incubated for 1 hour at 25 °C. Cdk9 kinase assay is performed using 50 nM of recombinant Cdk9/cyclin T in 50 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 3 μM Na3VO4, 2Km ATP/33P-γ-ATP mix, 5Km RNA polymerase CDT peptide and increasing concentration of PHA-767491 in a final volume of 30 μL, and incubated for 1 hour at 25 °C. After incubation, an amount of 150 μL of resin/formate (pH 3.0) is added to stop the reaction and capture unreacted 33P-γ-ATP, separating it from the phosphorylated substrate in solution. After 1 hour of rest, a volume of 50 μL supernatant is transferred to Optiplate 96-well plates. After the additon of 150 μL of Microscint 40, the radioactivity is counted in the TopCount.
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Zellassay: [1]
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Cell lines
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HeLa, MCF7, HCT-116, U2OS, A2780, K562, SF-539, SF-268, Ovcar8, SW480, COLO205, HCT-15, Jurkat, PC3, and NHDF
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Concentrations
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Dissolved in DMSO, final concentrations ~ 20 μM
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Incubation Time
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24 or 72 hours
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Method
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Cells are exposed to PHA-767491 for 24 or 72 hours. Cells are lysed and the ATP content in the well, used as a measure of viable cells, is determined using a thermostable firefly luciferase–based assay. Activation of caspase-3 and caspase-7 is measured as a ratio between treated sample and untreated control with a luciferase-based assay, containing a specific proluminescent substrate. DNA replication is measured as incorporation of nucleotide analog BrdU into DNA by flow cytometry.
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Tierstudie: [1]
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Animal Models
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Female SCID mice subcutaneously implanted with HL60 cells, male Hsd, athymic nu-nu mice subcutaneously implanted with HCT116 cells, A2780 or Mx-1 cells, and female Sprague-Dawley rats with DMBA-induced mammary carcinomas
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Formulation
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Dissolved in DMSO, and diluted in saline
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Dosages
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~50 mg/kg
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Administration
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Intravenous or oral administration twice a day
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Solubility
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1% DMSO/30% polyethylene glycol/1% Tween 80,
30 mg/mL
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* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Umrechnung verschiedener Modelltiere basierend auf BSA (Wert basierend auf Daten aus FDA Draft Guidelines)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
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0.025
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0.02
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0.007
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Km factor
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20
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20
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12
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12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Um beispielsweise die Resveratrol-Dosis für eine Maus (22,4 mg/kg) auf eine Dosis basierend auf dem BSA für eine Ratte zu ändern, multiplizieren Sie 22,4 mg/kg mit dem Km-Faktor für eine Maus und dividieren Sie dann durch den Km-Faktor für eine Ratte. Diese Berechnung ergibt eine Ratten-Äquivalentdosis für Resveratrol von 11,2 mg/kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Chemische Informationen
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Molecular Weight (MW)
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213.24
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Formula
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C12H11N3O
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CAS No.
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845714-00-3
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Storage
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3 years -20℃Powder
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6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
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Synonyms
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CAY10572
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Solubility (25°C) *
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In vitro
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DMSO
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24 mg/mL
(112.54 mM)
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Water
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<1 mg/mL
(
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Ethanol
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<1 mg/mL
(
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In vivo
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1% DMSO/30% polyethylene glycol/1% Tween 80
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30 mg/mL
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* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Chemical Name
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2-(pyridin-4-yl)-6,7-dihydro-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-4(5H)-one
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Molaritätsrechner Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner
Produktgruppe : Zellzyklus > CDK-Inhibitor
