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Molekulargewicht:
396,49 Dinaciclib (SCH727965) ist ein neuartiger und potenter CDK-Inhibitor für CDK2, CDK5, CDK1 und CDK9 mit IC50 von 1 nM, 1 nM, 3 nM und 4 nM, bzw. Es blockiert auch den DNA-Einbau von Thymidin (dThd). Phase 3.
Biologische Aktivität Dinaciclib ist auch ein potenter DNA-Replikationshemmer, der den DNA-Einbau von Thymidin (dThd) in A2780-Zellen mit einer IC50 von 4 nM blockiert. Dinaciclib unterdrückt stark die Phosphorylierung von Rb auf Ser 807/811 bei Konzentrationen > 6,25 nM, was mit der Beobachtung übereinstimmt, dass 4 nM Konzentrationen für eine 50%ige Hemmung des dThd-DNA-Einbaus im gleichen Zellmodell erforderlich sind. Bedeutsamerweise korreliert die vollständige Unterdrückung der Rb-Phosphorylierung mit dem Einsetzen der Apoptose, wie durch das Auftreten des p85 PARP-Spaltprodukts in Zellen angezeigt, die > 6,25 nM Dinaciclib ausgesetzt waren. Dinaciclib ist gegen ein breites Spektrum menschlicher Tumorzelllinien aktiv. Die Zugabe von Dinaciclib während der Hydroxyharnstoff-Exposition unterdrückt auch die Akkumulation von γ-H2AX in einer dosisabhängigen Weise. Dinaciclib hemmt die Proliferation von Melanomzellen und treibt Melanomzellen in eine massive Apoptose. Dinaciclib induziert die Apoptose mehrerer Osteosarkom-Zelllinien, einschließlich solcher, die gegen Doxorubicin und Dasatinib resistent sind. Dinaciclib schwächt die Phosphorylierung von RNAP II bei Serin 2 und die Phosphorylierung des CDK-Inhibitors p27Kip1 bei Threonin 187 ab. Bei 12 - 40 nM Dinaciclib (4 bis 16 Stunden nach Zugabe von Dinaciclib) kommt es zu einer Verringerung der Phosphorylierungsaktivität. Dinaciclib reduziert auch die Phosphorylierung von Rb bei Serin 807/811. Dinaciclib induziert in ähnlichem Ausmaß die Apoptose von schein- und p53-depletierten U2OS-Zellen. Die ip-Anwendung von Dinaciclib in einer Dosierung von 8, 16, 32 und 48 mg/kg täglich über 10 Tage führt zu einer Tumorhemmung von 70 %, 70 %, 89 % bzw. 96 %. Dinaciclib MED (wirksame Mindestdosis) scheint Protokoll (nur als Referenz) Kinase-Assay zu sein: [1]
Cyclin/CDK kinase assay
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Recombinant cyclin/CDK holoenzymes are purified from Sf9 cells engineered to produce baculoviruses that express a specific cyclin or CDK. Cyclin/CDK complexes are typically diluted to a final concentration of 50 μg/mL in a kinase reaction buffer containing 50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, and 0.1 mM sodium orthovanadate. For each kinase reaction, 1 μg of enzyme and 20 μL of a 2-μM substrate solution (a biotinylated peptide derived from histone H1) are mixed and combined with 10 μL of diluted Dinaciclib. The reaction is started by the addition of 50 μL of 2 μM ATP and 0.1 μCi of 33P-ATP. Kinase reactions are incubated for 1 hour at room temperature and are stopped by the addition of 0.1% Triton X-100, 1 mM ATP, 5 mM EDTA, and 5 mg/mL streptavidin-coated SPA beads. SPA beads are captured using a 96-well GF/B filter plate and a Filtermate universal harvester. Beads are washed twice with 2 M NaCl and twice with 2 M NaCl containing 1% phosphoric acid. The signal is then assayed using a TopCount 96-well liquid scintillation counter.
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Zellassay: [1]
Cell lines
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A2780 cells
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Concentrations
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0 μM -5 μM
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Incubation Time
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24 hours
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Method
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A2780 cells are maintained in DMEM plus 10% fetal bovine serum and passaged twice weekly by detaching the monolayer with trypsin-EDTA. One hundred microliters of A2780 cells (5 × 103 cells) are added per well to a 96-well Cytostar-T plate and incubated for 16 hours to 24 hours at 37 °C. Dinaciclib is serially diluted in complete media plus 2% 14C-labeled dThd. Media are removed from the Cytostar T plate; 200 μL of various Dinaciclib dilutions are added in quadruplicate; and the cells are incubated for 24 hours at 37 °C. Accumulated incorporation of radiolabel is assayed using scintillation proximity and measured on a TopCounTM.
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Umrechnung verschiedener Modelltiere basierend auf BSA (Wert basierend auf Daten aus FDA Draft Guidelines)
Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
|
10
|
3
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1.8
|
0.4
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0.15
|
0.08
|
0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
|
0.5
|
0.24
|
0.15
|
0.05
|
0.025
|
0.02
|
0.007
|
Km factor
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20
|
20
|
12
|
12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Um beispielsweise die Resveratrol-Dosis für eine Maus (22,4 mg/kg) auf eine Dosis basierend auf dem BSA für eine Ratte zu ändern, multiplizieren Sie 22,4 mg/kg mit dem Km-Faktor für eine Maus und dividieren Sie dann durch den Km-Faktor für eine Ratte. Diese Berechnung ergibt eine Ratten-Äquivalentdosis für Resveratrol von 11,2 mg/kg.
Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Chemische Informationen
Molecular Weight (MW)
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396.49
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Formula
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C21H28N6O2
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CAS No.
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779353-01-4
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Storage
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3 years -20℃Powder
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6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
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Synonyms
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Solubility (25°C) *
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In vitro
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DMSO
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26 mg/mL
heating
(65.57 mM)
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Water
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<1 mg/mL
(
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Ethanol
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8 mg/mL
heating
(20.17 mM)
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In vivo
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15% Captisol
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6 mg/mL
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Chemical Name
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(2S)-1-[3-ethyl-7-[[(1-oxido-3-pyridinyl)methyl]amino]pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl]-2-piperidineethanol
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Stock Solution (1ml DMSO)
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1mM
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10mM
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20mM
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30mM
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Mass(mg)
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0.39649
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3.9649
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7.9298
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11.8947
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Produktgruppe : Zellzyklus > CDK-Inhibitor