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Molekulargewicht: 334,33 RG108 ist ein Inhibitor der DNA-Methyltransferase mit einer IC50 von 115 nM, verursacht kein Einfangen kovalenter Enzyme.
Biologische Aktivität RG108 blockiert effektiv DNA-Methyltransferasen in vitro und verursacht keine kovalenter Enzymeinfang in menschlichen Zelllinien. Die Inkubation von Zellen mit niedrigen mikromolaren Konzentrationen von RG108 führt zu einer signifikanten Demethylierung der genomischen DNA ohne nachweisbare Toxizität. Interessanterweise verursacht RG108 eine Demethylierung und Reaktivierung von Tumorsuppressorgenen, beeinflusst jedoch nicht die Methylierung von zentromeren Satellitensequenzen. In einer weiteren Studie wird die Synthese und In-vitro-Analyse eines biotinylierten RG108-Konjugats untersucht, um die Interaktionen mit DNA-Methyltransferase-Enzymen zu bewerten. In einer kürzlich durchgeführten Studie wurde gezeigt, dass RG108 die DNA-Methyltransferasen-Aktivität in SM-abgeleiteten iPS-Zellen im Vergleich zu den nativen SMs signifikant reduzieren kann. Protokoll (nur als Referenz) Kinase-Assay: [1]
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In vitro methylation assay
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The substrate DNA for the in vitro methylation assay is a 798 bp fragment (−423/+375 relative to the initiation codon) from the promoter region of the human p16Ink4a gene. The methylation reaction contains 350 to 400 ng substrate DNA and 4 units of M.SssI methylase (0.5 μM) in a final volume of 50 μL. Inhibitors are added to final concentrations of 10, 100, 200, and 500 μM, respectively. Reactions are done at 37 °C for 2 hours. After completion, the reaction is inactivated at 65 °C for 15 minutes and the DNA is purified using PCR Purification kit. Three hundred nanograms of purified DNA is digested for 3 hours at 60 °C with 30 units of BstUI and analyzed on 2% Tris-borate EDTA agarose gels.
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Zellassay: [1]
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Cell lines
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HCT116 cells
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Concentrations
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1-100 μM
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Incubation Time
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5 days
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Method
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For the determination of cellular growth and viability, cells are stained with trypan blue and counted using a standard counting grid.
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Umrechnung verschiedener Modelltiere basierend auf BSA (Wert basierend auf Daten aus FDA Draft Guidelines)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
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0.025
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0.02
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0.007
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Km factor
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20
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20
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12
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12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Um beispielsweise die Resveratrol-Dosis für eine Maus (22,4 mg/kg) auf eine Dosis basierend auf dem BSA für eine Ratte zu ändern, multiplizieren Sie 22,4 mg/kg mit dem Km-Faktor für eine Maus und dividieren Sie dann durch den Km-Faktor für eine Ratte. Diese Berechnung ergibt eine Ratten-Äquivalentdosis für Resveratrol von 11,2 mg/kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Chemische Informationen
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Molecular Weight (MW)
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334.33
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Formula
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C19H14N2O4
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CAS No.
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48208-26-0
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Storage
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3 years -20℃Powder
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6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
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Synonyms
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Solubility (25°C) *
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In vitro
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DMSO
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67 mg/mL
(200.4 mM)
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Water
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<1 mg/mL
(
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Ethanol
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67 mg/mL
(200.4 mM)
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* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Chemical Name
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1H-Indole-3-propanoic acid, α-(1,3-dihydro-1,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)-, (αS)-
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Produktgruppe : Epigenetik > DNA-Methyltransferase-Inhibitor
