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Molekulargewicht: 223,28 PR-619 ist ein nicht-selektiver, reversibler Inhibitor der deubiquitinylierenden Enzyme (DUBs) mit EC50 von 1-20 μM.
PR-619 ist eine Zelle -permeabler Breitspektrum-DUB-Inhibitor der Pyridinamin-Klasse, dessen bekannte Ziele ATXN3, BAP1, JOSD2, OTUD5, UCH-L1, UCH-L3, UCH-L5/UCH37, USP1, 2, 4, 5, 7, 8, 9X, 10 . umfassen , 14, 15, 16, 19, 20, 22, 24, 28, 47, 48, VCIP135, YOD1 sowie deISGylase PLpro, deNEDDylase DEN1 und deSUMOlyase SENP6. PR-619 erhöht nachweislich die Gesamtproteinpolyubiquitinierung in HEK293T-Zellen in einer dosis- und zeitabhängigen Weise (20 bis 150 μM, 0,5 bis 20 h). Die Behandlung mit PR619 führt zu einer Hochregulierung sowohl der K 48 - als auch der K 63-verknüpften polyUb-Ketten. PR-619 induziert den Zelltod von HCT116 mit EC50-Werten von 6,3 μM. Protokoll (nur als Referenz) Kinase-Assay: [1]
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Ub-PLA2 assay
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Recombinant enzymes in 20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 2 mM CaCl2 and 2 mM β-mercaptoethanol (DUB assay buffer) are preincubated with single doses or dose ranges of PR-619 or P22077 for 30 minutes in a 96 well plate before the addition of Ub-PLA2 and NBD C6-HPC. The liberation of a fluorescent product within the linear range of the assay is monitored at room temperature using a fluorescence plate reader. Vehicle (2%(v/v) DMSO) and 10 mM N-ethylmaleimide are included as controls. Where ≥60% inhibition is observed, EC50 values are determined using a sigmoidal dose response equation.
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Zellassay: [1]
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Cell lines
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HCT116, HEK293T
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Concentrations
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0.5-50 μM
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Incubation Time
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72 h
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Method
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72 h hours later, 0.2 mg/mL resazurin prepared in phosphate-buffered saline is added to each well and the cells are incubated for an additional 3-6 h. The fluorescence of the resazurin reduction product is measured using Ex=535 nm and Em=590 nm filters on a fluorimeter. The EC50 values are calculated in Prism.
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Umrechnung verschiedener Modelltiere basierend auf BSA (Wert basierend auf Daten aus FDA Draft Guidelines)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
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0.025
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0.02
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0.007
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Km factor
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20
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20
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12
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12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Um beispielsweise die Resveratrol-Dosis für eine Maus (22,4 mg/kg) auf eine Dosis basierend auf dem BSA für eine Ratte zu ändern, multiplizieren Sie 22,4 mg/kg mit dem Km-Faktor für eine Maus und dividieren Sie dann durch den Km-Faktor für eine Ratte. Diese Berechnung ergibt eine Ratten-Äquivalentdosis für Resveratrol von 11,2 mg/kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Chemische Informationen
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Molecular Weight (MW)
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223.28
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Formula
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C7H5N5S2
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CAS No.
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2645-32-1
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Storage
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3 years -20℃Powder
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6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
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Synonyms
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Solubility (25°C) *
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In vitro
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DMSO
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45 mg/mL
(201.54 mM)
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Water
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<1 mg/mL
(
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Ethanol
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<1 mg/mL
(
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Produktgruppe : Ubiquitin > DUB-Inhibitor
