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Molekulargewicht:
294,30 AG-490 (Tyrphostin B42) ist ein EGFR-Inhibitor mit einer IC50 von 0,1 μM, 135-fach selektiver für EGFR gegenüber ErbB2, hemmt auch JAK2 ohne Aktivität an Lck, Lyn, Btk, Syk und Src.
Biologische Aktivität AG-490 hemmt die HER-2-gesteuerte Zellproliferation mit einer IC50 von 3,5 μM. Entsprechend der spezifischen dosisabhängigen Hemmung von konstitutiv aktiviertem JAK2 in prä-B akuten Leukämie (ALL)-Zellen blockiert AG-490 (5 μM) das Wachstum aller ALL-Zellen fast vollständig, indem es den programmierten Zelltod induziert, ohne schädliche Auswirkungen auf normale Hämatopoese. AG-490 hemmt nicht die Aktivitäten von Lck, Lyn, Btk, Syk und Src. AG-490 (60-100 µM) blockiert die konstitutive Aktivierung von Stat3sm und hemmt das spontane sowie Interleukin 2-induzierte Wachstum von Mycosis fungoides (MF)-Tumorzellen mit IC50-Werten von 75 µM bzw. 20 µM. AG-490 hemmt das IL-2-vermittelte humane T-Zell-Wachstum mit einer IC50 von 25 μM, indem es die Aktivitäten von JAK3 und STAT5a/b blockiert. Obwohl AG-490 allein keine Wirkung auf die Proliferation von FDrv210H-Zellen bei einer Konzentration von 5 &mgr;M hat, kann AG-490 mit STI571 synergisieren, um seine inhibitorische Wirkung auf die p210bcr-abl-getriebene Proliferation zu verstärken. AG-490 hemmt signifikant die konstitutive Aktivierung von Stat3 in MOPC-, MPC11- und S194-Zellen, was zu einer dramatischen dosisabhängigen Apoptose führt. AG-490 (100 μM) hemmt die Akt-Phosphorylierung, hemmt die Aktivierung des nuklearen Faktors-κB und bewirkt die Aktivierung von GSK-3β, was zur Reduktion von c-Myc führt. AG-490 (50 μM) kann die Apoptose von Imatinib-resistenten BaF3-Zellen induzieren, die T315I- und E255K-Mutanten von Bcr-Abl exprimieren. AG-490 bei 30 &mgr;M hemmt nicht nur die Epo-induzierte Phosphorylierung von Wildtyp-JAK2, sondern auch die konstitutive Phosphorylierung der JAK2-V617F-Mutante. AG-490 hemmt auch wirksam das Zytokin-unabhängige Zellwachstum, das durch die JAK2 V617F-Mutante in BaF3-Zellen induziert wird. Die Verabreichung von AG-490 reduziert drastisch die Zahl der CD45+- und HLA-DR+-Zellen von 48 % und 46 % im Knochenmark unbehandelter Mäuse sowie 38 % und 22 % in der Milz unbehandelter Mäuse auf nicht nachweisbare Werte. Die in vivo-Verabreichung von AG-490 verursacht die Apoptose von Maus-Myelom-Tumorzellen, hemmt jedoch nicht die IL-12-vermittelte Makrophagenaktivierung und die IFN-γ-Produktion durch Lymphozyten. In Übereinstimmung mit der in vitro-Blockierung der Aktivität der JAK2 V617F-Mutante hemmt die Behandlung mit AG-490 mit 0,5 mg/Tag für 10 Tage wirksam die durch die JAK2 V617F-Mutante induzierte Tumorentstehung und die Tumorzellinvasion in Nacktmäusen. Die kombinierte Therapie mit AG-490 und IL-12 induziert in einem Maus-Myelom-Tumormodell größere Antitumorwirkungen als beide Wirkstoffe allein.
In-vitro-Kinase-Autophosphorylierung AG-490 wird in DMSO 10%-H2O-Ethanol 45% gelöst. Rohe Membranextrakte (0,125 μg/ml) werden mit EGF (20 nM) in 50 mM HEPES-Puffer, pH 7,6, und 125 mM NaCl für 15 Minuten bei 4 °C voraktiviert. Die Autophosphorylierungsaktivität von EGFR oder ErbB2-Kinase wird bei 4 °C für 30 Sekunden in V-förmigen 96-Well-Platten getestet. Membranextrakte (8 µl) werden in jede Vertiefung mit Reaktionsmischung (12 µl, 50 mM, HEPES, pH 7,4,125 mM NaCl, 12 mM M8Ac2, 2 mM MnCl2, 1 mM NaVO3, 1 µM ATP und 1 µCi[γ -32P]ATP, Endkonzentrationen) und steigende Konzentrationen von AG-490 (4 μL). Nach Beendigung durch Zugabe von heißem Probenpuffer werden die Proben auf einem 6% SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese-Minigel laufen gelassen, die Gele getrocknet und eine Autoradiographie während der linearen Belichtungszeit durchgeführt. Die Rezeptorbanden werden densitrometrisch gescannt und die Ergebnisse mit dem Ez-Fit-Programm analysiert. Für die Analyse der Autophosphorylierung von JAK2 wird JAK2 immunpräzipitiert unter Verwendung von Anti-JAK2-Antikörper aus Lysaten von G2-Zellen, die für 16 Stunden mit steigenden Konzentrationen von AG-490 (0–50 &mgr;M) vorbehandelt wurden. Immunkomplexe werden dann mit Anti-Phosphotyrosin-Antikörper immungeblottet. Eine dosisabhängige Hemmung der in vitro-Kinaseaktivität wird durch die Beurteilung der JAK2-Autophosphorylierung nachgewiesen.
Produktgruppe : Protein Tyrosinkinase > EGFR-Inhibitor
