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Molekulargewicht:
186,17 AG-18 hemmt EGFR mit IC50 von 35 µM.
Biologische Aktivität AG 18 hemmt EGFR und IR mit Ki von 11 µM und 12 mM. AG 18 hemmt die EGF-induzierte EGFR-Autophosphorylierung mit einer IC50 von 15 &mgr;M in A431-Zellen. AG 18 (10 μM) hemmt die EGF-induzierte Proliferation von GH3-Zellen. AG 18 (10 µM) bewirkt eine signifikante Hemmung der durch 10 nM und 1 µM Ghrelin induzierten Zellproliferation. AG 18 (10 μM) blockiert den Ghrelin-stimulierten Anstieg der ERK 1/2-Phosphorylierung in GH3-Zellen. AG 18 hemmt dosisabhängig die volumensensitive Freisetzung von [3H]Taurin in primären Astrozytenkulturen. AG 18 aktiviert die schwellungsinduzierte volumenabhängige D-[3H]Aspartat-Freisetzung aus primären astrozytären Kulturen. AG 18 (300 μM) hemmt die TPA-induzierte Stimulation der ICAM-1-Expression in einer dosisabhängigen Weise in A549-Epithelzellen. AG 18 (300 μM) hemmt auch die TPA-stimulierte NF-kappaB-DNA-Proteinbindung und die ICAM-1-Promotoraktivität in A549-Epithelzellen. AG 18 (300 μM) hemmt die TNF-alpha-induzierte NF-kappaB-DNA-Proteinbindung und die ICAM-1-Promotoraktivität in einer dosisabhängigen Weise in A549-Epithelzellen. Die IKK-Aktivität wird sowohl durch TNF-alpha als auch durch TPA stimuliert, und diese Effekte werden durch AG 18 (100 μM) in A549-Epithelzellen gehemmt. AG 18 (10 &mgr;M) verringert die Potenz von 5-HT um das 4-fache und reduziert die maximale Kontraktion auf 5-HT in der Halsschlagader. AG 18 (10 μM) verschiebt die KCl-induzierte Kontraktion um das 2-fache und verursacht die maximale signifikante Hemmung.
EGF-Rezeptor-Autophosphorylierung WGA-gereinigter EGF-Rezeptor aus A431-Zellen (0,5 µg/Assay) wird mit EGF (800 nM) für 20 min bei 4 aktiviert. Die Reaktion wird durch Zugabe von Mg(Ac)2 (60 mM), Tris-Mes-Puffer, pH 7,6 (50 mM) und [32P]ATP (20 pM, 5 µCi/Test) initiiert. Die Reaktion wird entweder bei 4 oder 15 durchgeführt und durch Zugabe von Natriumdodecylsulfat (SDS)-Probenpuffer (10% Glycerin, 50 mM Tris, pH 6,8, 5% β-Mercaptoethanol und 3% SDS) beendet. Die Proben werden auf einem 8% SDS-Polyacrylamidgel (SDS-PAGE) (hergestellt aus 30% Acrylamid und 0,8% Bis-(acrylamid) durchgeführt und enthalten 0,375 M Tris, pH 8,8, 0,1% SDS, 0,05% TEMED und 0,46% Ammonium Persulfat). Das Gel wird getrocknet und eine Autoradiographie mit einem Agfa Curix RP2-Röntgenfilm durchgeführt. Die relevanten radioaktiven Banden werden geschnitten und im Cerenkov-Modus gezählt. Die schnelle Phase der Autophosphorylierung wurde für weitere 10 min fortgesetzt. Das Ausmaß der Phosphorylierung, die in den ersten 10 s bei 15 ℃ abgeschlossen wurde, umfasst 1/3 des gesamten Autophosphorylierungssignals und spiegelt wahrscheinlich die Phosphorylierung der ersten Stelle des Rezeptors wider. Das 10-s-Intervall wird daher zur Verwendung in nachfolgenden Autophosphorylierungsexperimenten gewählt.
Methode GH3-Zellen werden mit 5 × 104 Zellen/Vertiefung in einem Medium ausplattiert, das 2% mit Aktivkohle gestripptes FCS und verschiedene Konzentrationen von Ghrelin, desoctanoyliertes Ghrelin und PMA oder EGF enthält, 72 Stunden lang unter Zugabe von 2 μCi/Vertiefung [3H]Thymidin für weitere 6 Stunden. Für die Ghrelin-Stimulation wird ein Zeitverlauf von 24 Stunden, 48 Stunden und 72 Stunden durchgeführt, und für weitere Experimente werden 72 Stunden gewählt. Es werden auch Studien durchgeführt, um die Wirkung von Ratten-Ghrelin- oder Desoctanoyl-Ghrelin-induzierter Proliferation und die Wirkung von U0126, GF109203X, AG 18, Wortmannin und H-89 auf die Ghrelin-induzierte MAPK-Stimulation zu untersuchen. AG 18 mit 10 &mgr;M wird 30 min vor jeder Behandlung zugegeben. Die Zellen werden vor dem Zählen in Gegenwart von Szintillationsflüssigkeit unter Verwendung eines Microbeta 1450 b-Zählers geerntet. Versuche werden mindestens dreimal wiederholt.
Produktgruppe : Protein Tyrosinkinase > EGFR-Inhibitor
