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Molekulargewicht:
467,92 Pelitinib (EKB-569) ist ein potenter irreversibler EGFR-Inhibitor mit einer IC50 von 38,5 nM. Phase2.
Biologische Aktivität Pelitinib zeigt im Vergleich zu dem eng verwandten c-erbB-2 sowie anderen Kinasen wie Src, Cdk4, c-Met, Raf und MEK/ERK mit IC50 . eine viel höhere inhibitorische Aktivität gegen EGFR von 282 nM für Src bis >20 μM für Cdk4. Dementsprechend hemmt die Behandlung mit Pelitinib signifikant die Autophosphorylierung von EGFR, aber nicht von c-Met in A431-Zellen. Pelitinib hemmt stark die Proliferation von normalen humanen Keratinozyten (NHEK) sowie von A431- und MDA-468-Tumorzellen mit IC50 von 61 nM, 125 nM bzw. 260 nM, während es nur geringe Aktivität gegen MCF-7-Zellen mit IC50 von zeigt 3,6 μM. Pelitinib hemmt die EGF-induzierte Phosphorylierung von EGFR in A431- und NHEK-Zellen mit einer IC50 von 20-80 nM sowie die Phosphorylierung von STAT3 mit einer IC50 von 30-70 nM. Pelitinib bei 75-500 nM hemmt auch spezifisch die Aktivierung von AKT und ERK1/2, ohne den NF-κB-Signalweg zu beeinflussen. In NHEK-Zellen hemmt Pelitinib auch stark die TGF-α-vermittelte EGFR-Aktivierung mit einer IC50 von 56 nM sowie die Aktivierung von STAT3 und ERK1/2 mit einer IC50 von 60 nM bzw. 62 nM. Eine orale Einzeldosis von 10 mg/kg Pelitinib hemmt die EGFR-Phosphorylierung in A431-Xenotransplantaten mit überexprimiertem EGFR stark um 90 % innerhalb von 1 Stunde und um > 50 % nach 24 Stunden. Die Verabreichung von 20 mg/kg/Tag Pelitinib hemmt die Tumorentstehung bei APCMin/+-Mäusen um 87%, was der Wirkung einer zweimaligen Anwendung von EKI-785 (40 mg/kg/Tag) entspricht, was einer höheren In-vivo-Wirksamkeit entspricht . Pelitinib hemmt in vivo selektiv die EGFR-Signalübertragung in Atemwegsepithelzellen. Im Mausmodell der epithelialen Remodellierung der Atemwege, die durch eine Virusinfektion induziert wird und einen verzögerten, aber dauerhaften Wechsel zur Becherzell-Metaplasie aufweist, korrigiert die Behandlung mit Pelitinib mit 20 mg/kg/Tag alle 3 Aspekte der epithelialen Remodellierung, indem sie die Zunahme von Zilien vollständig blockiert Zellen und Abnahme von Clara-Zellen und eine signifikante Hemmung der Metaplasie von Becherzellen. Protokoll (nur als Referenz) Kinase-Assay: [1]
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Autophosphorylation of EGFR in cells
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For experiments using cells in culture, A431 cells are treated with various concentrations of Pelitinib for 2.75 hours before co-incubation with 100 ng/mL EGF for 0.25 hour. Cells are washed twice with cold phosphate-buffered saline (PBS) before adding to lysis buffer (10 mM Tris, pH 7.5, 5 mM ethylenediamine tetra-acetic acid (EDTA), 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, 1% Sodium deoxycolate, 0.1 % SDS, 1 mM PMSF, 10 mg/mL pepstatin A, 10 mg/mL leupeptin, 20 KIU/mL aprotinin, 2 mM sodium orthovanadate, and 100 mM sodium fluoride) for 20 minutes on ice, before immunoprecipitation and SDS-PAGE-immunoblotting. For immunoprecipitation, cultured cells are placed in cold lysis buffer and immediately homogenized on ice with a polytron with several pulses. The homogenate is first centrifuged at 2500 rpm (20 minutes, 4 °C) and then again at 14,000 rpm in a microcentrifuge (10 minutes, 4 °C). Supernatants (1000 μg protein) are incubated for 2 hours at 4 °C with 15 mL of EGFR polyclonal antibody. After 2 hours, 50 μL of protein G plus/protein A agarose beads is added and incubated with constant rotation for 2 hours at 4 °C. After washing with lysis buffer, beads are boiled for 2 minutes in Laemmli sample buffer. Proteins are then resolved by SDS-PAGE, transferred to immobilon membrane and probed overnight with an anti-phosphotyrosine antibody conjugated with horseradish peroxidase (HRP). Membranes are developed using the ECL reagent. Total EGFR protein is determined by stripping membranes and re-probing with receptor-specific antibodies. Quantitation of bands is done by densitometry, using ImageQuant software with a Molecular Dynamics laser transmittance scanner.
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Zellassay: [2]
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Cell lines
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NHEK, A431, MCF-7, and MDA-468
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Concentrations
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Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM
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Incubation Time
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5 days
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Method
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Cells are seeded in 96-well dishes, and after 2 hours, Pelitinib is added and incubated for 5 days. After incubation, the medium is removed from each well and fresh medium (150 μL) + 1 mg/mL MTT solution (50 μL) is added. After incubation for 2 hours at 37 °C, the medium is replaced with 150 μL DMSO, and absorbance at 540 nm in each well is determined. The IC50 is calculated by linear regression of the data.
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Tierstudie: [1]
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Animal Models
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Athymic nu/nu female mice bearing subcutaneous A431 tumors, or APCMin/+ male mice, a murine model of human familial adenomatous polyposis (FAP)
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Formulation
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Dissolved in pH 2.0 water
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Dosages
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10, or 20 mg/kg/day
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Administration
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Oral gavage
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Solubility
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30% PEG400/0.5% Tween80/5% propylene glycol,
30 mg/mL
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* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Umrechnung verschiedener Modelltiere basierend auf BSA (Wert basierend auf Daten aus FDA Draft Guidelines)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
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0.025
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0.02
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0.007
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Km factor
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20
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20
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12
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12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Um beispielsweise die Resveratrol-Dosis für eine Maus (22,4 mg/kg) auf eine Dosis basierend auf dem BSA für eine Ratte zu ändern, multiplizieren Sie 22,4 mg/kg mit dem Km-Faktor für eine Maus und dividieren Sie dann durch den Km-Faktor für eine Ratte. Diese Berechnung ergibt eine Ratten-Äquivalentdosis für Resveratrol von 11,2 mg/kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Chemische Informationen
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Molecular Weight (MW)
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467.92
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Formula
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C24H23ClFN5O2
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CAS No.
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257933-82-7
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Storage
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3 years -20℃Powder
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6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
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Synonyms
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Solubility (25°C) *
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In vitro
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DMSO
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13 mg/mL
(27.78 mM)
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Water
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<1 mg/mL
(
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Ethanol
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<1 mg/mL
(
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In vivo
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30% PEG400/0.5% Tween80/5% propylene glycol
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30 mg/mL
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* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Chemical Name
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(E)-N-(4-(3-chloro-4-fluorophenylamino)-3-cyano-7-ethoxyquinolin-6-yl)-4-(dimethylamino)but-2-enamide
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Molaritätsrechner Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner
Produktgruppe : Protein Tyrosinkinase > EGFR-Inhibitor
