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Molekulargewicht:
469,94 PF-299804 ist ein potenter, irreversibler pan-ErbB-Inhibitor, meist gegen EGFR mit IC50 von 6 nM, wirksam gegen NSCLCs mit EGFR- oder ERBB2-Mutationen (resistent gegen Gefitinib ) sowie diejenigen, die die EGFR T790M-Mutation beherbergen. Phase 2.
Biologische Aktivität PF299804 ist ein spezifischer Inhibitor der ERBB-Kinasenfamilie. PF299804 hemmt die EGFR-Signalgebung und induziert Apoptose in der EGFR T790M-enthaltenden H3255 GR-Zelllinie. PF299804 ist in Gefitinib-sensitiven und Gefitinib-resistenten NSCLC-Zelllinien wirksam. PF299804 hemmt das Wachstum von H3255- und HCC827-Zellen, die manipuliert wurden, um EGFR T790M zu exprimieren. PF299804 hemmt die EGFR-Phosphorylierung in Gegenwart der T790M-Mutation. Es wird angenommen, dass PF-299804 die ERBB-Tyrosinkinaseaktivität irreversibel durch Bindung an die ATP-Stelle und kovalente Modifikation von nukleophilen Cysteinresten in den katalytischen Domänen von Mitgliedern der ERBB-Familie hemmt. PF299804 zeigt signifikante wachstumshemmende Wirkungen bei HER2-amplifizierten Magenkrebszellen (SNU216, N87) und hat niedrigere 50 %-Hemmkonzentrationswerte im Vergleich zu anderen EGFR-Tyrosinkinase-Hemmern, einschließlich Gefitinib, Lapatinib, BIBW-2992 und CI-1033 . PF299804 induziert Apoptose und G1-Arrest und hemmt die Phosphorylierung von Rezeptoren in der HER-Familie und nachgeschalteten Signalwegen einschließlich STAT3, AKT und extrazellulärer signalregulierter Kinasen (ERK) in HER2-amplifizierten Magenkrebszellen. PF299804 blockiert auch die Heterodimerbildung von EGFR/HER2, HER2/HER3 und HER3/HER4 sowie die Assoziation von HER3 mit p85α in SNU216-Zellen. Eine kürzlich durchgeführte Studie verwendet siebenundvierzig menschliche Brustkrebs- und immortalisierte Brustepithellinien, um die Hemmwirkung von PF299804 zu bewerten verabreichtes PF299804 hemmt effektiv das Wachstum von HCC827 Del/T790M-Xenotransplantaten Niedrige orale Verabreichung von PF-299804 (15 mg/kg) verursacht eine signifikante Antitumoraktivität, einschließlich deutlicher Tumorregressionen in einer Vielzahl von humanen Tumor-Xenotransplantatmodellen, die Mitglieder der ERBB-Familie exprimieren und/oder überexprimieren oder die Doppelmutation (L858R/T790M) in ERBB1 (EGFR) enthalten, die mit einer Resistenz gegen Gefitinib und Erlotinib verbunden ist. Protokoll (nur als Referenz) Kinase-Assay: [1]
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ELISA-Based ERBB Kinase Assay
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The ERBB1, ERBB 2, and ERBB4 cytoplasmic fusion proteins are made by cloning the ERBB1 sequence (Met-668 to Ala-1211), ERBB2 (Ile-675 to Val-1256), and ERBB4 sequence (Gly-259 to Gly-690) into the baculoviral vector pFastBac using PCR. Proteins are expressed in baculovirusinfected Sf9 insect cells as GST fusion proteins. The proteins are purified by affinity chromatography using glutathione sepharose beads. Inhibition of ERBB tyrosine kinase activity is assessed using an ELISA-based receptor tyrosine kinase assay. Kinase reactions (50 mM HEPES, pH 7.4, 125 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 100 μM sodium orthovanadate, 2 mM dithiothreitol, 20 μM ATP, PF299804 or vehicle control, and 1-5 nM GST-erbB per 50 μL of reaction mixture) are run in 96-well plates coated with 0.25 mg/mL poly-Glu-Tyr. The reactions are incubated for 6 minutes at room temperature while being shaken. Kinase reactions are stopped by removal of the reaction mixture, and then the wells are washed with wash buffer (0.1% Tween 20 in PBS). Phosphorylated tyrosine residues are detected by adding 0.2 μg/mL antiphosphotyrosine antibody (Oncogene Ab-4; 50 μL/well) coupled to horseradish peroxidase (HRP) diluted in PBS containing 3% BSA and 0.05% Tween 20 for 25 minutes while being shaken at room temperature. The antibody is removed, and plates are washed in wash buffer. HRP substrate (SureBlue3,3,5,5-tetramethyl benzidine or TMB) is added (50 μL per well) and incubated for 10-20 minutes while it is shaken at room temperature. The TMB reaction is stopped with the addition of 50 μL of stop solution (0.09 N H2SO4). The signal is quantified by measuring absorbance at 450 nm. IC50 values are determined for PF299804 using the median effect method.
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Zellassay: [1]
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Cell lines
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Various NSCLC cell lines
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Concentrations
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0-20 nM
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Incubation Time
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72 hours
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Method
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Growth and inhibition of growth is assessed by 5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS) assay. This assay, a colorimetric method fordetermining the number of viable cells, is based on the bioreduction of MTS by cells to a formazan product that is soluble in cell culture medium, can be detected spectrophotometrically. The cells are exposed totreatment for 72 hours, and the number of cells used per experiment is determined empirically. All experimental points are set up in 6 to 12 wells, and all experiments are repeated at least thrice. The data are graphically displayed using GraphPad Prism version 3.00 for Windows (GraphPad Software). The curves are fitted using a nonlinear regression model with a sigmoidal dose response.
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Tierstudie: [1]
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Animal Models
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HCC827-GFP or HCC827-Del/T790M lung cancer cells (in 0.2 mL of PBS) are inoculated s.c. into the lower-right quadrant of the flank of nude mice
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Formulation
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PF299804 is dissolved in DMSO in 10 mM at -20 °
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Dosages
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10 mg/kg
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Administration
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Administered via oral gavage
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Solubility
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1% DMSO/30% polyethylene glycol/1% Tween 80, pH 9,
10 mg/mL
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* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Umrechnung verschiedener Modelltiere basierend auf BSA (Wert basierend auf Daten aus FDA Draft Guidelines)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
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0.025
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0.02
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0.007
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Km factor
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20
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20
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12
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12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Um beispielsweise die Resveratrol-Dosis für eine Maus (22,4 mg/kg) auf eine Dosis basierend auf dem BSA für eine Ratte zu ändern, multiplizieren Sie 22,4 mg/kg mit dem Km-Faktor für eine Maus und dividieren Sie dann durch den Km-Faktor für eine Ratte. Diese Berechnung ergibt eine Ratten-Äquivalentdosis für Resveratrol von 11,2 mg/kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Chemische Informationen
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Molecular Weight (MW)
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469.94
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Formula
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C24H25ClFN5O2
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CAS No.
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1110813-31-4
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Storage
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3 years -20℃Powder
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6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
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Synonyms
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Solubility (25°C) *
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In vitro
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DMSO
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19 mg/mL
(40.43 mM)
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Water
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<1 mg/mL
(
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Ethanol
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<1 mg/mL
(
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In vivo
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1% DMSO/30% polyethylene glycol/1% Tween 80, pH 9
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10 mg/mL
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* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Chemical Name
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(E)-N-(4-(3-chloro-4-fluorophenylamino)-7-methoxyquinazolin-6-yl)-4-(piperidin-1-yl)but-2-enamide
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Molaritätsrechner Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner
Produktgruppe : Protein Tyrosinkinase > EGFR-Inhibitor
