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Molekulargewicht:
529.72 UNC1215 ist ein potenter und selektiver MBT-Antagonist (bösartiger Hirntumor), der L3MBTL3 mit IC50 von 40 nM und Kd von 120 nM bindet, 50-fach selektiv gegenüber anderen Mitglieder der humanen MBT-Familie.
Biologische Aktivität
UNC1215 bindet L3MBTL3 und verdrängt kompetitiv mono- oder dimethyllysinhaltige Peptide. Diese Sonde ist im Vergleich zu anderen Mitgliedern der menschlichen MBT-Familie mehr als 50-fach selektiv. UNC1215 hat eine etwa 75-fache Selektivität für L3MBTL3 gegenüber L3MBTL1. UNC1215 zeigt bei Konzentrationen bis zu 30 μM keine Aktivität gegen die Tandem-Tudor-Domäne von UHRF1, die Chromodomäne von CBX7 oder die PHD-Domäne von JARID1A. Röntgenkristallographie identifiziert einen einzigartigen polyvalenten 2:2-Wechselwirkungsmodus zwischen UNC1215 und L3MBTL3. In Zellen ist UNC1215 nicht toxisch und bindet L3MBTL3 direkt über die Kme-Bindungstasche der MBT-Domänen. UNC1215 erhöht die zelluläre Mobilität von GFP-L3MBTL3-Fusionsproteinen und Punktmutanten, die die Kme-Bindungsfunktion von GFP-L3MBTL3 stören, phänokopieren die Auswirkungen von UNC1215 auf die Lokalisation. UNC1215 wird verwendet, um eine neue Kme-abhängige Interaktion von L3MBTL3 mit BCLAF1 aufzudecken, einem Protein, das an der Reparatur von DNA-Schäden und Apoptose beteiligt ist.
AlphaScreen-Assay Compound-Platten (1 μL bei 10 oder 30 mM höchste Konzentration) werden in 1 × Assay-Puffer (20 mM Tris pH 8,0, 25 mM NaCl, 2 mM DTT und 0,05 % Tween-20) über 2 Schritte mit a . verdünnt Multimek-Roboterpipette und 1 μL wird in die Vertiefungen von Proxiplates mit 384-Well-Assays getüpfelt. Zu diesen Platten werden 9 µL Protein-Peptid-Mix in 1× Assaypuffer mittels Multidrop gegeben und 30 min bei Raumtemperatur inkubiert. An diesem Punkt werden 2 µl Streptavidin-Konjugat-Donor und Nickel-Chelat-Akzeptor-Kügelchen (45 µg/ml in 1x Assay-Puffer) zugegeben, die Platten werden weitere 30 min im Dunkeln bei Raumtemperatur inkubiert. Nach der Inkubation werden die Platten auf einem EnVision-Mulilabel-Lesegerät mit HTS-Alpha-Schirmlaser gelesen. Die angegebenen Screenings werden bis zu 10 oder 30 μM durchgeführt, und daher sollte beachtet werden, dass die als inaktiv bezeichneten Verbindungen tatsächlich nur innerhalb des getesteten Konzentrationsbereichs inaktiv sind. PHF23 und JARID1A sind GST-markiert und folglich werden für diese Assays GST-Akzeptorkügelchen verwendet. Es sollte beachtet werden, dass alle positiven Bindungskurven für L3MBTL4, die erzeugt wurden, Kurven mit sehr flachen Steigungen ergaben, was auf eine unspezifische Interaktion hindeutet. Die Daten für die IC50-Werte werden aus Wiederholungsläufen berechnet, indem die Datenpunkte für jede Verbindungskonzentration gemittelt und unter Verwendung einer 4-Parameter-Kurvenanpassung aufgetragen werden.
Produktgruppe : Epigenetik > Epigenetischer Reader-Domänen-Inhibitor
