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Molekulargewicht:
415,44 I-BET151 (GSK1210151A) ist ein neuartiger selektiver BET-Inhibitor für BRD2, BRD3 und BRD4 mit einer IC50 von 0,5 µM, 0,25 µM bzw. 0,79 µM.\ n
Biologische Aktivität I-BET151 zeigt eine starke Selektivität für eine breite Palette verschiedener Proteintypen wie COX-2, P450, Aurora B, GSK3β, PI3K-γ, GPCR, Ionenkanäle und Transporter. Ähnlich wie I-BET762 (GSK525762A) zeigt I-BET151 eine starke Bindungsaffinität zu BRD2, BRD3 und BRD4 mit einer KD von 0,02–0,1 μM und hemmt signifikant die Lipopolysaccharid-stimulierte IL-6-Zytokinproduktion in humanen mononuklearen peripheren Blutzellen (PBMC) und Vollblut (WB) sowie Ratten-WB mit IC50 von 0,16 µM, 1,26 µM bzw. 1,26 µM. I-BET151 (0,5 oder 5 μM) hemmt die Bindung von BETs (BRD2, BRD3, BRD4 und BRD9), jedoch nicht die Bindung von 23 anderen Bromodomänenproteinen in HL60-Kernextrakt an acetylierte Histonpeptide. I-BET151 hat eine starke Wirksamkeit gegen Zelllinien, die verschiedene MLL-Fusionen beherbergen, wie MV4;11, RS4;11, MOLM13 und NOMO1 Zellen mit IC50 von 15-192 nM. Konsequenterweise entfernt I-BET151 das koloniebildende Potenzial von MLL-fusionsgetriebenen Leukämien (MOLM13) vollständig, jedoch nicht von Leukämien, die durch Tyrosinkinase-Aktivierung (K562) ausgelöst werden. I-BET151 zeigt auch eine starke Wirksamkeit sowohl in Flüssigkultur- als auch in klonogenen Assays unter Verwendung primärer muriner Vorläufer, die entweder mit MLL-ENL oder MLL-AF9 transformiert wurden. Die Behandlung mit I-BET151 induziert signifikant Apoptose und prominenten G0/G1-Arrest in MLL-Fusionszelllinien, die durch verschiedene MLL-Fusionen angetrieben werden (MOLM13 und MV4;11 enthalten MLL-AF9 bzw. MLL-AF4), jedoch nicht die K562-Zellen, wahrscheinlich aufgrund von die Hemmung der Transkription von BCL2, C-MYC und CDK6 durch Blockieren der Rekrutierung von BRD3/4-, PAFc- und SEC-Komponenten in die Transkriptionsstartstelle (TSS). Die Verabreichung von I-BET151 mit 30 mg/kg/Tag hemmt signifikant das Tumorwachstum von Mäuse-MLL-AF9 und menschlicher MLL-AF4-Leukämie bei Mäusen und bietet einen deutlichen Überlebensvorteil.
Fluoreszenzanisotropie (FP) Ligandenverdrängungsassay Alle Komponenten werden in Puffer der Zusammensetzung 50 mM HEPES pH 7,4, 150 mM NaCl und 0,5 mM CHAPS mit Endkonzentrationen von BRD 2/3/4 75 nM, Fluoreszenzligand 5 nM gelöst. 10 µl dieser Reaktionsmischung werden mit einem Mikro-Multidrop in die Vertiefungen gegeben, die 100 nl verschiedener Konzentrationen von I-BET151 oder DMSO-Vehikel (1% endgültig) in einer schwarzen Greiner 384-Well-Mikrotiterplatte mit geringem Volumen enthalten, und im Dunkeln 60 Minuten bei . äquilibriert Zimmertemperatur. Die Fluoreszenzanisotropie wird in Envision abgelesen (lex = 485 nm, lEM = 530 nm; dichroitisch = 505 nM). Methode
Zellen werden in 384-Well- oder 96-Well-Platten 24 oder 72 Stunden lang verschiedenen Konzentrationen von I-BET151 ausgesetzt. Für Assays zur Hemmung des Zellwachstums werden die Platten mit CellTiter-Glo-Reagenz unter Verwendung eines Volumens, das dem Zellkulturvolumen in den Wells entspricht, hinzugefügt, ungefähr 2 Minuten lang geschüttelt und das Chemilumineszenzsignal wird auf dem Analyst GT- oder EnVision-Plattenleser abgelesen. Für Zellproliferationsassays wird CellTiter-Aqueous One in jede Vertiefung gegeben und die Platten werden 4 Stunden bei 37 °C inkubiert. Die Absorption wird bei 490 nm auf einem SpectraMax Gemini-Lesegerät gelesen
Produktgruppe : Epigenetik > Epigenetischer Reader-Domänen-Inhibitor
