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Molekulargewicht:
375,47 ENMD-2076 hat selektive Aktivität gegen Aurora A und Flt3 mit IC50 von 14 nM und 1,86 nM, 25-fach selektiv für Aurora A als gegenüber Aurora B und weniger potent zu VEGFR2/KDR und VEGFR3, FGFR1 und FGFR2 und PDGFRα. Phase 2.
Biologische Aktivität ENMD-2076 zeigt Aktivität gegen mehrere an der Angiogenese beteiligte Kinasen an, einschließlich FLT3, RET, FLT4/VEGFR3, SRC, NTRK1, CSF1R/FMS, LCK, VEGFR2/KDR, FGFR1/2 und PDGFRα mit IC50 von 1,86-120 nM. ENMD-2076 hemmt das Wachstum einer Vielzahl von menschlichen soliden Tumor- und hämatopoetischen Krebszelllinien mit einer IC50 von 0,025 bis 0,7 μM, was Apoptose und G2/M-Phasenstillstand induziert. ENMD-2076 induziert eine Regression oder vollständige Hemmung des Tumorwachstums in Tumor-Xenotransplantat-Modellen, die aus Brust-, Dickdarm-, Melanom-, Leukämie- und multiplen Myelom-Zelllinien stammen. ENMD-2076 ist das L (+) Tartratsalz von ENMD-981693. ENMD-2076 zeigt eine signifikante Zytotoxizität gegenüber Myelomzelllinien (IM9, ARH-77, U266, RPMI 8226, MM.1S, MM.1R, NCI-H929) und Primärzellen mit IC50 von 2,99 bis 7,06 µM, die Apoptose induzieren. ENMD-2076 weist auf eine geringe Zytotoxizität gegenüber hämatopoetischen Vorläufern hin. ENMD-2076 hemmt den Phosphoinositid-3-Kinase/Akt-Signalweg und reguliert Survivin und den X-chromosomalen Inhibitor der Apoptose herunter. ENMD-2076 hemmt auch die Aurora A- und B-Kinasen und induziert einen G2/M-Zellzyklusarrest. ENMD-2076 hat anhaltende hemmende Wirkungen auf die Aktivierung von Flt3 sowie VEGFR2/KDR und FGFR1/2 im HT29-Xenotransplantatmodell. ENMD-2076 könnte die Bildung neuer Blutgefäße verhindern und gebildete Gefäße im MDA-MB-231 Xenograft-Modell zurückbilden. [1] Die orale Behandlung mit ENMD-2076 (50, 100, 200 mg/kg pro Tag) hemmt das Tumorwachstum in humanen H929-Plasmozytom-Xenotransplantaten mit signifikanter Reduktion von Phospho-Histone 3 (pH3), Ki-67 und Angiogenese, und auch eine signifikante Zunahme der gespaltenen Caspase-3.
Kinase-Assays Rekombinante Aurora A- und B-Kinase-Enzyme und geeignete PanVera Z'-Lyte-Kinase-Assay-Kits werden erworben. Die Assays werden in Kinase-Assaypuffer (50 mM HEPES, pH 7,5, 10 mM MgCl2, 5 mM EGTA, 0,05% Brij-35), ergänzt mit 2 mM DTT, durchgeführt. Die Aktivitäten werden bei einer ATP-Konzentration bestimmt, die dem scheinbaren Km für jedes Enzym äquivalent ist, und einer Enzymkonzentration, die nach 1 Stunde zu ungefähr 30% Phosphorylierung des Peptidsubstrats führt. Dosis-Wirkungs-Kurven der relativen Enzymaktivität gegen die ENMD-2076-Konzentration werden mit Grafit aufgezeichnet und zur Berechnung der IC50-Werte verwendet. Die Wirksamkeit der freien Base von ENMD-2076 gegen ein ausgewähltes Panel von 100 Kinaseenzymen wird unter Verwendung des SelectScreen-Kinase-Profiling-Dienstes bestimmt. Die ATP-Konzentrationen entsprechen dem scheinbaren Km für jedes Enzym oder 100 μM, wenn der scheinbare Km nicht erreicht werden konnte. Die prozentuale Hemmung wird bei einer Konzentration der freien Base ENMD-2076 von 1 &mgr;M bestimmt; Bei Kinasen, bei denen eine signifikante Hemmung festgestellt wird, werden die IC50-Werte durch Erstellen vollständiger 10-Punkte-Dosis-Wirkungs-Kurven bestimmt.
Methode Die antiproliferative Wirkung von ENMD-2076 auf adhärente Tumorzelllinien wird durch Ausplattieren von 500 Zellen pro Well in einer 96-Well-Platte und Inkubation mit ENMD-2076 für 96 Stunden gemessen. Die Zellproliferation wird unter Verwendung des Sulforhodamin B-Assays gemessen. Die von Leukämie abgeleiteten, nichtadhärenten Zelllinien werden durch Ausplattieren von 5 × 10³ Zellen pro Vertiefung in einer 96-Well-Platte untersucht. Die Zellen werden 48 Stunden mit ENMD-2076 inkubiert und dann wird das Überleben unter Verwendung des Alamar Blue-Reagenzes getestet. Um die Wirkung von ENMD-2076 auf die durch den VEGF- und Fibroblasten-Wachstumsfaktor (FGF) induzierte Proliferation von menschlichen Nabelvenen-Endothelzellen (HUVEC) zu messen, werden die Zellen 6 Stunden lang Serum ausgehungert, dann mit der freien Base von ENMD-2076 behandelt und stimuliert mit 5 ng/ml bFGF oder 25 ng/ml VEGF (R und D Systems) für 72 Stunden. Die Zellproliferation wird mit WST gemessen.
Produktgruppe : Protein Tyrosinkinase > FLT3-Inhibitor
