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Molekulargewicht:
479,48 LY411575 ist ein potenter γ-Sekretase-Inhibitor mit einer IC50 von 0,078 nM/0,082 nM (membran-/zellbasiert), hemmt auch die Notch-Spaltung mit einer IC50 von 0,39 nM.
Biologische Aktivität LY-411575 hemmt die γ-Sekretase, die durch die Substrate wie das Amyloid-Vorläuferprotein (APP) und die Notch-S3-Spaltung bestimmt werden kann. LY-411575, das die Notch-Aktivierung blockiert, führt zu Apoptose in primären und immortalisierten KS-Zellen. Eine orale Dosis von 10 mg/kg LY-411575 senkt die Hirn- und Plasma-Aβ40 und -42 dosisabhängig. LY-411575 reduziert das kortikale Aβ40 bei jungen (präplaque) transgenen CRND8-Mäusen (ED50 ≈ 0,6 mg/kg) und führt bei höheren Dosen (> 3 mg/kg) zu einer signifikanten Thymusatrophie und intestinalen Becherzellhyperplasie. Das therapeutische Fenster ist nach oraler und subkutaner Verabreichung und bei jungen und alten CRND8-Mäusen ähnlich. Sowohl die Thymus- als auch die intestinalen Nebenwirkungen sind nach einer 2-wöchigen Auswaschphase reversibel. Eine dreiwöchige Behandlung mit 1 mg/kg LY411575 reduziert das kortikale Aβ40 um 69 %, ohne Darmeffekte hervorzurufen, obwohl eine zuvor nicht berichtete Veränderung der Fellfarbe beobachtet wurde.
Assays für Aβ und NICD Verfahren zur Messung der γ-Sekretase-Aktivität in Membranen, die aus HEK293-Zellen hergestellt wurden, die APP exprimieren, wurden zuvor beschrieben (Zhang L et al. Biochemistry 40, 5049-5055). Intakte HEK293-Zellen, die entweder APP oder NΔE exprimieren, werden mit verschiedenen Konzentrationen von LY-411,575 4 Stunden lang bei 37 °C behandelt. Im Fall von Zellen, die NΔE exprimieren, werden Zellen lysiert, die Zelllysate werden auf einem 4-12% NuPAGE-Gel aufgetrennt und das prozessierte NICD-Fragment wird über Western-Blot mit einem spaltungsstellenspezifischen Antikörper nachgewiesen. Die Hemmung der NICD-Produktion wird durch punkt-densitometrische Analyse unter Verwendung von FluorChem quantifiziert. Im Fall von Zellen, die APP exprimieren, wird das konditionierte Medium gesammelt, bei 10.000 × g für 5 Minuten zentrifugiert, um Zelltrümmer zu entfernen, und vor der Bestimmung der Aβ-Spiegel bei –20°C gelagert. Aβ40 und -42, die in HEK293-Membran- und zellbasierten Assays produziert wurden, sowie Plasma-Aβ40 und Cortex-Aβ40 von TgCRND8-Mäusen werden ohne Vorbehandlung unter Verwendung eines auf Elektrochemilumineszenz-Detektion basierenden Immunoassays analysiert. Plasma-Aβ42 wird durch Enzyme-linked Immunosorbent Assay gemessen. Ein im Handel erhältlicher enzymgebundener Immunosorbent-Assay-Kit wird verwendet, um Cortex Aβ42 gemäß den Anweisungen des Herstellers zu messen.
Produktgruppe : Proteasen > Gamma-Sekretase-Hemmer
