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Molekulargewicht:
520,88 Avagacestat (BMS-708163) ist ein potenter, selektiver, oral bioverfügbarer γ-Sekretase-Inhibitor von Aβ40 und Aβ42 mit einer IC50 von 0,3 nM und 0,27 nM, die eine 193 -fache Selektivität gegen Notch. Phase 2.
Biologische Aktivität BMS-708163 zeigt eine schwächere Selektivität für die Hemmung der Notch-Prozessierung mit dem 193-fachen IC50-Wert. Die orale Verabreichung von BMS-708163 reduziert die Aβ40-Spiegel für längere Zeiträume in Gehirn, Plasma und Liquor bei Ratten und Hunden signifikant. BMS-708163 hat bei Hunden (3 mg/kg während 6 Monaten) keine dosislimitierende Wirkung mit einem hohen Hirn-Plasma-Verhältnis (2,4).
Hemmung der Aβ-Bildung BMS-708163 wird auf Aβ40- oder Aβ42-Hemmung in Zellen unter Verwendung von H4 APP751 SWE-Klon 8.20, einer H4-Neurogliom-Zelllinie, die die schwedische Mutante von APP751 stabil exprimiert, getestet. Die Zellen werden durch zweimal wöchentliche Passage bei einer Verdünnung von 1:20 in der logarithmischen Phase gehalten. Für IC50-Bestimmungen werden 30 &mgr;l Zellen (1,5 × 104 Zellen/Well) in DMEM-Medium mit 0,0125% BSA direkt in 384-Well-Platten mit 0,1 &mgr;l seriell verdünntem BMS-708163 in DMSO ausgesät. Nach 19-stündiger Inkubation in 5% CO2 bei 37 °C werden die Platten kurz zentrifugiert (103 U/min, 5 min). Ein 10 ul-Aliquot von jeder Vertiefung wird für Aβ40-Messungen auf eine zweite Assay-Platte übertragen. Antikörpercocktails werden durch Verdünnung in 40 mM Tris-HCl (pH 7,4) mit 0,2% BSA frisch hergestellt und auf Testplatten gegeben. Für Aβ42-Messungen, Antikörper, die für das Aβ42-Neoepitop (565, entwickelt bei Bristol-Myers Squibb; konjugiert an das Wallac-Reagenz) und die N-terminale Sequenz des Aβ-Peptids (26D6, entwickelt bei SIBIA/Bristol-Myers Squibb; konjugiert an APC .) spezifisch sind ) werden gemischt und 20 µl der Mischung werden in jede Vertiefung der inkubierten Zellplatte gegeben, was eine Endkonzentration von 0,8 ng/Vertiefung 565 und 75 ng/Vertiefung 26D6 ergibt. Für die Aβ40-Messungen werden Antikörper, die spezifisch für das Aβ40-Neoepitop (TSD, entwickelt bei Bristol-Myers Squibb; konjugiert an das Wallac-Reagenz) und 26D6 wie oben beschrieben sind, gemischt und 20 µL der Mischung werden zu den 10 µL-Aliquots gegeben, die zuvor von der Zellplatte entfernt, was eine Endkonzentration von 1,6 ng/Well TSD und 17,5 ng/Well 26D6 ergibt. Antikörper enthaltende Testplatten werden mit Aluminiumfolie versiegelt und über Nacht bei 4 °C inkubiert. Das Signal wird unter Verwendung eines Viewlux-Zählers bestimmt und die IC50-Werte werden bestimmt.
Produktgruppe : Proteasen > Gamma-Sekretase-Hemmer
