AZD1080 612487-72-6

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Molekulargewicht: 334,37 AZD1080 ist ein selektiver, oral aktiver, hirndurchlässiger GSK3-Inhibitor, hemmt humanes GSK3α und GSK3β mit einem Ki von 6,9 nM bzw. 31 nM, zeigt eine >14-fache Selektivität gegenüber CDK2, CDK5, CDK1 und Erk2.
AZD1080 ist ein selektiver, oral aktiver, hirndurchlässiger GSK3-Inhibitor, hemmt humanes GSK3α und GSK3β mit einem Ki von 6,9 nM bzw. 31 nM, zeigt eine >14-fache Selektivität gegenüber cdk2, cdk5 , cdk1 und Erk2. AZD1080 hemmt die Tau-Phosphorylierung in Zellen, die menschliches Tau exprimieren, mit einer IC50 von 324 nM. AZD1080 hemmt die Tau-Phosphorylierung im Rattenhirn nach oraler Verabreichung mit einem Gehirn/Plasma-Expositionsverhältnis von 0,5 – 0,8 bei Spitzenkonzentrationen. AZD1080 kehrt kognitive Defizite um und rettet dysfunktionale Synapsen bei Mäusen. Eine akute orale Behandlung mit AZD1080 hemmt die periphere GSK3-Aktivität, führt zu einer dosisabhängigen Verringerung des Verhältnisses von phosphorylierter zu Gesamtglykogensynthase (GS) mit einer mittleren maximalen Hemmwirkung von 49 % bei der höchsten Dosis (10 μmol/kg) bei 2 h nach der Dosierung. Ein hirndurchlässiger GSK3-Inhibitor.

Kinase Assay

GSK3 scintillation proximity assay is done. The competition experiments are carried out in duplicate with 10 concentrations of the inhibitor in clear-bottomed microtiter plates. The biotinylated peptide substrate biotin-AAEELDSRAGS(PO3H2)PQL, is added at a final concentration of 2 μM in an assay buffer containing 6 milliunits of recombinant human GSK3 (equal mix of both α and β), 12 mM MOPS, pH 7.0, 0.3 mM EDTA, 0.01% β-mercaptoethanol, 0.004% Brij 35, 0.5% glycerol, and 0.5 μg of bovine serum albumin/25 μl and preincubated for 10–15 min. The reaction is initiated by the addition of 0.04 μCi of [γ-33P]ATP and unlabeled ATP in 50 mM Mg(Ac)2 to a final concentration of 1 μM ATP and assay volume of 25 μl. Blank controls without peptide substrate are used. After incubation for 20 min at room temperature, each reaction is terminated by the addition of 25 μl of stop solution containing 5 mM EDTA, 50 μM ATP, 0.1% Triton X-100, and 0.25 mg of streptavidin-coated SPA beads corresponding to 35 pmol of binding capacity. After 6 h the radioactivity is determined in a liquid scintillation counter.

Zellassay: [1]

Cell lines	3T3 fibroblasts stably expressing 4-repeat human tau
Concentrations	~20mM
Incubation Time	0-8 h
Method	3T3 fibroblasts are engineered to stably express four-repeat tau protein. These cells have high endogenous levels of GSK3 that is able to phosphorylate tau protein constitutively. This phosphorylation is inhibited by LiCl. After treatment with different compounds, cultures are washed twice with 5 mM MgCl2-PBS. Extracts for Western blot analysis are prepared by homogenizing cells in ice-cold extraction buffer consisting of 20 mM HEPES, pH 7.4, 100 mM NaCl, 10 mM NaF, 1% Triton X-100, 1 mM sodium orthovanadate, 10 mM EDTA, and protease inhibitors (2 mM phenylmethylsulfonyl fluoride, 10 μg/ml aprotinin, 10 μg/ml leupeptin, and 10 μg/ml pepstatin). The samples are homogenized at 4 °C, and protein content is determined by Bradford method. Total protein (25 μg) is electrophoresed on 10% SDS-PAGE gel and transferred to a nitrocellulose membrane. The experiments are performed using the following primary antibodies: tau Ser(P)-396, 1:1000; Tau5, 1:1000; and anti-GSK3β, 1:1000. The filters are incubated with the antibody at 4 °C overnight in 5% nonfat dried milk. A secondary antibody (1:5000), followed by ECL detection reagents are used for immunodetection. Quantitation of immunoreactivity is performed by densitometric scanning.

Tierstudie: [1]

Animal Models	C57BL/6 mice
Formulation	water with 0.5% ascorbic acid, 0.01% EDTA, pH 2.0
Dosages	3 or 10 μmol/kg, 6 mL/kg
Administration	oral gavage
Solubility	30% PEG400/0.5% Tween80/5% propylene glycol, 20 mg/mL
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.

Umrechnung verschiedener Modelltiere basierend auf BSA (Wert basierend auf Daten aus FDA Draft Guidelines)

Species	Baboon	Dog	Monkey	Rabbit	Guinea pig	Rat	Hamster	Mouse
Weight (kg)	12	10	3	1.8	0.4	0.15	0.08	0.02
Body Surface Area (m2)	0.6	0.5	0.24	0.15	0.05	0.025	0.02	0.007
Km factor	20	20	12	12	8	6	5	3

Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by	Animal B Km
	Animal A Km

Um beispielsweise die Resveratrol-Dosis für eine Maus (22,4 mg/kg) auf eine Dosis basierend auf dem BSA für eine Ratte zu ändern, multiplizieren Sie 22,4 mg/kg mit dem Km-Faktor für eine Maus und dividieren Sie dann durch den Km-Faktor für eine Ratte. Diese Berechnung ergibt eine Ratten-Äquivalentdosis für Resveratrol von 11,2 mg/kg.

Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×	mouse Km(3)	= 11.2 mg/kg
	rat Km(6)

Chemische Informationen

Molecular Weight (MW)	334.37
Formula	C19H18N4O2
CAS No.	612487-72-6

Storage	3 years -20℃Powder
	6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
Synonyms

Solubility (25°C) *	In vitro	DMSO	52 mg/mL (155.51 mM)
		Water	<1 mg/mL (
		Ethanol	<1 mg/mL (
	In vivo	30% PEG400/0.5% Tween80/5% propylene glycol	20 mg/mL
* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble. * Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.

Chemical Name	1H-Indole-5-carbonitrile, 2-hydroxy-3-[5-(4-morpholinylmethyl)-2-pyridinyl]-

Molaritätsrechner Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner

Produktgruppe : PI3K/Akt/mTOR > GSK-3-Inhibitor