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Molekulargewicht: 373,49 SANT-1 bindet direkt an Smoothened (Smo)-Rezeptor mit Kd von 1,2 nM und hemmt Smo-Agonisteneffekte mit IC50 von 20 nM.
Biologische Aktivität SANT-1 hemmt Wild Typ und onkogene Smo mit gleicher Potenz. SANT-1 wirkt der SAG-induzierten Signalwegaktivierung in Shh-LIGHT2-Zellen entgegen. SANT-1 ist in der Lage, die BODIPY-Cyclopamin-Bindung an Smo-exprimierende Zellen zu blockieren, aber SANT-1 ist nicht in der Lage, diese Assoziation mit Hintergrundspiegeln vollständig zu hemmen. Dies legt nahe, dass ihre Wechselwirkungen mit Smo dessen Affinität für Cyclopamin verändern könnten, anstatt direkt um die Cyclopamin-Bindung zu konkurrieren. SANT-1 blockiert die Aktivierung des Signalwegs in SmoA1-LIGHT2-Zellen mit Potenzen, die denen ähnlich sind, die im Shh-LIGHT2-Assay beobachtet wurden. SANT-1 hat unterschiedliche inhibitorische Aktivitäten in den Shh-LIGHT2- und BODIPY-Cyclopamin-Assays und ist ungewöhnlich stark bei der Blockierung der SAG-vermittelten Signalwegaktivierung. SANT-1 hemmte effizient die Cyclopamin- und Jervin-induzierte Translokation von Smo zum primären Zilien. SANT-1 hemmt die PKA-Stimulation des Smo-Handels zum proximalen Zilien. In Kombination mit dem HDAC-Inhibitor SAHA ist SANT-1 in der Lage, die Zellproliferation und Koloniebildung der Gemcitabin-resistenten Pankreas-Adenokarzinom-Zelllinien Panc-1 und BxPC-3 zu unterdrücken.
Screens auf kleine Moleküle auf Hh-Weg-Modulatoren Shh-N (N-terminales Fragment von Shh ohne Cholesterinmodifikation)-konditioniertes Medium wird aus einer HEK 293-Zellinie erhalten, die stabil mit Shh-N-Expressions- und Neomycin-Resistenzkonstrukten transfiziert ist. Die Shh-N-produzierenden HEK 293-Zellen werden in DMEM, das 10 % (Vol./Vol.) FBS und 400 &mgr;g/ml G418 enthält, bis zu einer Konfluenz von 80 % gezüchtet. Das Medium wird dann durch DMEM ersetzt, das 2% (Vol./Vol.) FBS enthält, und nach 1 Tag Wachstum wird das Medium gesammelt und durch eine 0,22-&mgr;m-Membran filtriert. Kontrollmedium wird aus HEK 293-Zellen erhalten. Shh-LIGHT2-Zellen werden dann in 96-Well-Platten bis zur Konfluenz kultiviert und mit den kleinen Molekülen (0,714 µg/ml; ≈ 2 µM Verbindung in jedem Well) in Gegenwart von entweder Shh-N-konditioniertem Medium oder HEK 293-Kontrollmedium behandelt (1:25 Verdünnung in DMEM mit 0,5% Rinderserum). Nach Inkubation der behandelten Zellen für 30 h bei 37 °C werden die Aktivitäten der zellulären Glühwürmchen und der Renilla-Luciferase gemessen.
Produktgruppe : Stammzellen & Wnt > Igel/geglätteter Inhibitor
