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Molekulargewicht:
468,47 Mubritinib (TAK-165) ist ein potenter Inhibitor von HER2/ErbB2 mit IC50 von 6 nM; keine Aktivität gegenüber EGFR, FGFR, PDGFR, JAK1, Src und Blk. Phase 1.
Biologische Aktivität Mubritinib weist eine > 4000-fache Selektivität gegenüber anderen Tyrosinkinasen wie EGFR, FGFR, PDGFR, Jak1, Src und Blk auf. Mubritinib blockiert selbst in einer niedrigen Konzentration von 0,1 μM signifikant die HER2-Phosphorylierung, was zur Herunterregulierung des PI3K-Akt- und MAPK-Signalwegs in der Zelllinie BT474 mit hohem HER2-Spiegel führt. Mubritinib zeigt nicht nur eine hochpotente antiproliferative Wirkung in der ErbB2-überexprimierenden Krebszelllinie BT474 mit einer IC50 von 5 nM, sondern zeigt auch eine ausgeprägte antiproliferative Wirkung in Zelllinien mit schwach exprimiertem HER2 mit IC50 von 53 nM, 90 nM und 91 nM für LNCaP, LN-REC4 bzw. T24. Mubritinib zeigt keine inhibitorischen Aktivitäten gegen PC-3-Zellen mit sehr schwach exprimiertem HER2 mit IC50 von 4,62 µM, sowie EGFR-überexprimierende HT1376- und ACHN-Zelllinien mit IC50 von >25 µM. Mubritinib hemmt das LN-REC4-Xenotransplantat signifikant mit einem Tumorvolumenverhältnis von Behandlung/Kontrolle von 26,5%. Obwohl die orale Verabreichung von Mubritinib (10 oder 20 mg/kg pro Tag) in vitro das Wachstum von UMUC-3- und ACHN-Zellen nicht hemmt (IC50 von 1,812 bzw ACHN-Xenotransplantate mit einem Tumorvolumenverhältnis von Behandlung/Kontrolle von 22,9 bzw. 26 % im Vergleich zu Herceptin (20 mg/kg), das für das UMUC-3-Tumorwachstum unwirksam ist.
Hemmung der HER2/erbB2-Tyrosinkinaseaktivität BT-474-Zellen werden auf 24-Well-Platten ausgesät und über Nacht kultiviert. Mubritinib wird dann in verschiedenen Konzentrationen zugesetzt. Nach 2 Stunden Inkubation werden die Zellen direkt in Natriumdodecylsulfat (SDS)-Probenpuffer (200 µl) geerntet. Aliquots, die gleiche Mengen an Gesamtzellextrakt enthalten, werden auf 7,5% bis 15% Gradienten-SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (PAGE) laufen gelassen. Nach der Elektrophorese werden Proteine auf eine Polyvinylidenfluorid (PVDF)-Membran für die Western-Blot-Analyse unter Verwendung eines relevanten Primärantikörpers übertragen. Der Proteinnachweis wird durch ein verbessertes Chemilumineszenz-(ECL)-Nachweisverfahren erreicht. Das Ausmaß der Tyrosinphosphorylierung von HER2/erbB2 wird mit dem Lumino-Image-Analysator LAS-1000 plus gemessen. Die Konzentration von Mubritinib, die die HER2/erbB2-Phosphorylierung um 50 % hemmt (IC50), wird aus einer Dosis-Wirkungs-Kurve berechnet, die durch eine lineare Regression der Reaktion nach der Methode der kleinsten Quadrate mit der SAS-Software erstellt wurde. Methode Zellen werden in 6-Well-Platten ausgesät und über Nacht kultiviert. Anschließend wird Mubritinib in verschiedenen Konzentrationen zugegeben und die Zellen werden 72 Stunden lang kontinuierlich behandelt. Nach der Inkubationszeit werden die Zellen zur Messung der antiproliferativen Aktivität gezählt.
Produktgruppe : Protein Tyrosinkinase > HER2-Inhibitor
