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Molekulargewicht:
375,55 MI-3 (Menin-MLL-Inhibitor) ist ein potenter Menin-MLL-Interaktionsinhibitor mit einer IC50 von 648 nM.
Biologische Aktivität In HEK293-Zellen greift MI-3 auf das Proteinziel zu und hemmt effektiv die Menin-MLL-AF9-Interaktion. MI-3 blockiert effektiv die MLL-Fusionsprotein-vermittelte leukämische Transformation durch Herunterregulieren der Expression von Zielgenen, die für die onkogene Aktivität des MLL-Fusionsproteins erforderlich sind. In menschlichen MLL-Leukämie-Zelllinien, die verschiedene MLL-Translokationen beherbergen, blockiert MI-3 effektiv die Zellproliferation und induziert Apoptose. Hochdurchsatz-Screening FITC-MBM1 bei 15 nM und Menin bei 150 nM im FP-Puffer werden gemischt und 1 Stunde im Dunkeln bei Raumtemperatur inkubiert. Für das Punktscreening werden die 0,2 µl jeder Verbindung (20 µM Endkonzentration, 1% DMSO) zu 20 µl des Aliquots des Protein-Peptid-Gemischs gegeben und auf 384-Well-Platten im Dunkeln bei Raumtemperatur für 1 h inkubiert. Beim Bestätigungsscreening werden die seriellen Verdünnungsplatten mit Verbindungen in DMSO hergestellt und verwendet, um den Menin-FITC-MBM1-Komplex zu titrieren. Die Änderung der Fluoreszenzpolarisation wird bei 525 nm nach Anregung bei 495 nm mit dem PHERAstar Mikroplatten-Lesegerät (BMG) überwacht und zur Bestimmung der IC50-Werte mit dem Origin 7.0-Programm angewendet. Methode Die MLL-AF9- und E2A-HLF-transduzierten murinen BMC werden in 12-Well-Platten mit einer Konzentration von 5 × 103 Zellen/ml mit 1 ml Methylcellulose-Medium M3234 mit 20% IMDM-Medium, 1% Penicillin/Streptomycin, IL-3 . ausplattiert und 0,25% DMSO oder Verbindungen. 6 Tage später werden Kolonien mit 100 &mgr;l Iodnitrotetrazoliumchlorid bei einer Endkonzentration von 1 mg/ml gefärbt, bei 37°C für 30 Minuten inkubiert und gezählt. Zur erneuten Ausplattierung für die 2. Runde werden die Kolonien am Tag 6 ohne Färbung gezählt und die Zellen wurden mit 1 × PBS-Puffer ausgewaschen und in IMDM-Medium, das 15% FBS, 1% Penicillin/Streptomycin und IL-3 enthält, resuspendiert. 5 × 103 Zellen werden in 12-Well-Platten mit 1 ml Methylcellulose-Medium M3234 ausplattiert, das 20 % IMDM-Medium, 1 % Penicillin/Streptomycin, IL-3 und 0,25 % DMSO oder Verbindungen enthält. 6 Tage später werden die Kolonien gefärbt und gezählt.
Produktgruppe : Epigenetik > Histon-Methyltransferase-Hemmer
