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Molekulargewicht:
331.81 (R)-Nepicastat HCl, das R-Enantiomer von Nepicastat HCl, ist ein potenter und selektiver Inhibitor mit IC50 von 25,1 nM und 18,3 nM für Rinder- und Humandopamin -β-Hydroxylase, mit vernachlässigbarer Affinität zu zwölf anderen Enzymen und dreizehn Neurotransmitter-Rezeptoren.
Biologische Aktivität (R)-Nepicastat erzeugt in vitro eine konzentrationsabhängige Hemmung der bovinen und menschlichen Dopamin-β-Hydroxylase-Aktivität. (R)-Nepicastat (30 mg/kg, po) reduziert den Noradrenalin-Gehalt, den Dopamin-Gehalt und das Dopamin/Noradrenalin-Verhältnis in der Mesenterialarterie und dem linken Ventrikel von spontan hypertensiven Ratten (SHRs).
In-vitro-Studien Die Dopamin-Beta-Hydroxylase-Aktivität von Rindern und Menschen wird durch Messung der Umwandlung von Tyramin in Octopamin untersucht. Humane Dopamin-beta-Hydroxylase wird aus dem Kulturmedium der Neuroblastomzellinie SK-N-SH gereinigt. Der Assay wird bei pH 5,2 und 32 °C in einem Medium durchgeführt, das 0,125 M Natriumacetat, 10 mM Fumarat, 0,5 ± 2 µM CuSO4, 0,1 mg/ml Katalase, 0,1 mM Tyramin und 4 mM Ascorbat enthält. In einem typischen Assay werden 0,5 ± 1 mu Enzym zu der Reaktionsmischung zugegeben und anschließend wird eine Substratmischung, die Katalase, Tyramin und Ascorbat enthält, zugegeben, um die Reaktion zu starten (Endvolumen 0,2 ml). Die Proben werden mit oder ohne die entsprechende Konzentration an Nepicastat (RS-25560-197, S-Enantiomer) oder RS-25560-198 (R-Enantiomer) bei 37 °C für 30-40 Minuten inkubiert. Die Reaktion wird durch die Stopplösung gequencht, die 25 mM EDTA und 240 µM 3-Hydroxytyramin (interner Standard) enthält. Die Proben werden durch Umkehrphasen-Hochdruckflüssigkeitschromatographie (HPLC) mit Ultraviolett-(UV)-Detektion bei 280 nM auf Octopamin analysiert. Der HPLC-Lauf wird mit einer Flussrate von 1 ml/min mit einer LiChroCART 125-4 RP-18-Säule und isokratischer Elution mit 10 mM Essigsäure, 10 mM 1-Heptansulfonsäure, 12 mM Tetrabutylammoniumphosphat und 10 % durchgeführt. Methanol. Die verbleibende prozentuale Aktivität wird anhand von Kontrollen (ohne RS 25560) berechnet, mit internen Standards korrigiert und an eine nichtlineare Konzentrations-Wirkungs-Kurve mit vier Parametern angepasst. Die Aktivität von Nepicastat an zwölf ausgewählten Enzymen und Rezeptoren wird unter Verwendung etablierter Assays bestimmt. Bindungsdaten werden durch iterative Kurvenanpassung an eine logistische Gleichung mit vier Parametern analysiert. Ki-Werte werden aus den IC50-Werten nach der Cheng-Pruso€-Gleichung berechnet. Die enzymhemmende Aktivität wird als IC50 ausgedrückt (Konzentration, die erforderlich ist, um eine 50%ige Hemmung der Enzymaktivität zu erzeugen).
Produktgruppe : Stoffwechsel > Hydroxylase-Inhibitor
