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Molekulargewicht:
305,17 AG-1024 (Tyrphostin) hemmt die IGF-1R-Autophosphorylierung mit einer IC50 von 7 µM, ist weniger wirksam gegenüber IR mit einer IC50 von 57 µM und unterscheidet spezifisch zwischen InsR und IGF -1R (im Vergleich zu anderen Tyrphostinen).
Biologische Aktivität AG-1024 blockiert den IGF-1-Rezeptor und die IR-Autophosphorylierung mit IC50 von 7 µM bzw. 57 µM. AG-1024 hemmt auch die Rezeptor-Tyrosin-Kinase-Aktivität gegenüber exogenen Substraten (TKA) mit IC50-Werten von 18 µM bzw. 80 µM. AG-1024 (10 μM) hemmt die Zellproliferation zeitabhängig und induziert Apoptose in MCF-7-Zellen nach 48 Stunden um 20,1 % und >40 % in Kombination mit Bestrahlung (10 Gy), stärker als Bestrahlung (10 Gy) allein um 11,8 %, was mit einer Herunterregulierung von Phospho-Akt1 und bcl-2 und einer Hochregulierung von Bax, p53 und p21 verbunden ist. AG-1024 hemmt die Proliferation von Melanomzellen signifikant mit einem IC50 von AG-1024-Behandlung reguliert die Expression von Bcr-Abl und P-Akt herunter und reguliert die DNA-PKcs-Expression in UT7-9- und Ba/F3-p210-Zellen hoch, Dies führt zu einem verringerten klonogenen Überleben und einer geringeren Proliferation. AG-1024 hemmt auch signifikant die Proliferation von Zellen, die gegen den BCR-ABL-Inhibitor STI571 resistent sind, was mit einer dosisabhängigen Abnahme der Bcr-ABL-Proteinexpression korreliert. Die Verabreichung von AG-1024 in einer Dosis von 30 &mgr;g über 10 Tage hemmt signifikant das Tumorwachstum des Ba/F3-p210-Xenotransplantats bei Mäusen.
Hemmung von IGF-1- und insulinstimulierter Zellproliferation NIH-3T3-Zellen, die IGF-1 oder Insulinrezeptoren überexprimieren, werden auf 96-Well-Platten (2.000-5.000 Zellen/Well) ausplattiert und über Nacht in Vollmedium gehalten. Die Zellen werden dann 120 Stunden lang gegen DMEM ausgetauscht, das 1% FBS in Gegenwart von 10 nM IGF-1 oder Insulin und verschiedenen Konzentrationen von AG-1024 enthält. Medium wird alle 48 Stunden ausgetauscht. Zu den angegebenen Zeiträumen wird das Medium aus den Wells abgesaugt und 100 µl MTT in jedes Well gegeben. Anschließend werden die Zellen 4 Stunden bei 37 °C inkubiert und durch Zugabe von 100 µL Isoamylalkohol und 20 Minuten Schütteln lysiert. Anschließend wird die Platte im ELISA-Reader bei 570 und 690 nm gelesen. Der IC50-Wert wird zum 120-Stunden-Zeitpunkt berechnet. Methode Zellen werden 24, 48 oder 72 Stunden lang AG-1024 ausgesetzt. Zur Bestimmung der Proliferation werden Zellen geerntet und mit Trypanblau-Ausschluss gezählt. Die Apoptose wird durch zweifache Färbung von MCF-7 mit Fluorescein-Antidigoxigenin und Propidiumiodid bewertet. Kurz gesagt werden fixierte Zellen mit PBS gewaschen, in TdT-Puffer mit TdT-Enzym und Dig-dUTP für 60 Minuten suspendiert und in FITC-Blockierungslösung mit Anti-Dig-Fluorescein für 30 Minuten bei Raumtemperatur suspendiert und an einem dunklen Ort aufbewahrt. Die Zellen werden dann in Puffer gespült und in Propidiumiodid/RNase A-Lösung für 30 Minuten resuspendiert, dann durch Durchflusszytometrie analysiert. Zur Bewertung von Phospho-Akt1, Bax, p53, bcl-2 und p21 werden Zellen lysiert und durch Western-Blot analysiert.
Produktgruppe : Protein Tyrosinkinase > IGF-1R-Inhibitor
