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Molekulargewicht:
393,23 Picropodophyllin (PPP) ist ein selektiver IGF-1R-Inhibitor mit einer IC50 von 1 nM. Phase 1/2.
Biologische Aktivität In intakten Zellen hemmt PPP effizient IGF-1-stimulierten IGF-1R, Akt (Ser 473) und Erk1/2-Phosphorylierung. Picropodophyllin hemmt spezifisch das Zellwachstum und induziert Apoptose in kultivierten IGF-1R-positiven Tumorzellen. Picropodophyllin sensibilisiert HMCL, primäre humane MM- und murinen 5T33MM-Zellen synergistisch gegenüber ABT-737 und ABT-199, indem es die Lebensfähigkeit der Zellen weiter verringert und die Apoptose verstärkt. Picropodophyllin und Sorafenib unterdrücken synergistisch die Proliferation und Motilität hepatozellulärer Karzinomzellen. Bei SCID-Mäusen, denen humanes ES-1, BE und PC3 xenotransplantiert wurden, verursacht Picropodophyllin (20 mg/kg/12 h, ip) eine vollständige Tumorregression. Im 5T33MM-Mausmodell zeigt Picropodophyllin ebenfalls eine ausgeprägte Antitumoraktivität und bewirkt eine signifikante Verlängerung des Überlebens.
In-vitro-Tyrosinkinase-Assays Es wird ein Assay der IGF-1R-katalysierten Substratphosphorylierung von pTG unter Verwendung eines 96-Well-Platten-Tyrosinkinase-Assay-Kits durchgeführt. Wir verwenden rekombinanten epidermalen Wachstumsfaktorrezeptor, immunpräzipitiertes IR von HEPG2, immunpräzipitiertes IGF-1R von P6-Zellen und IGF-1R immundepletierter Überstand von P6 (repräsentiert [non-IGF-1R Tyrosinkinasen"). Nach 30-minütiger Behandlung der Rezeptoren mit den gewünschten Verbindungen im Kinasepuffer [50 mM HEPES Puffer (pH 7,4), 20 mM MgCl2, 0,1 MnCl2 und 0,2 Na3VO4] wird die Kinasereaktion durch Zugabe von ATP aktiviert Das phosphorylierte Polymersubstrat wird mit einem Phosphotyrosin- spezifischer monoklonaler Antikörper, konjugiert an Meerrettichperoxidase, Klon PT-66. Die Farbe wird mit dem chromogenen Substrat der Meerrettichperoxidase O-Phenylendiamindihydrochlorid entwickelt und durch Spektrophotometrie (ELISA-Reader) quantifiziert. Die IGF-1R-Tyrosin-Autophosphorylierung wird durch einen Sandwich-ELISA-Test analysiert. Kurz gesagt, 96 -Well-Platten werden über Nacht bei 4°C mit 1 μg/Well eines Antikörpers gegen die IGF-1R-β-Untereinheit beschichtet.Die Platten werden mit 1% BSA in PBS Tween für 1 h blockiert und dann 80 μg/Well vontot Al Proteinlysat aus der P6-Zelllinie wird zugegeben. Als Negativkontrolle verwenden wir Gesamtproteinlysat aus der R-Zelllinie. Die untersuchten Verbindungen werden in Tyrosinkinasepuffer ohne ATP bei Raumtemperatur für 30 min vor der Kinaseaktivierung mit ATP zugegeben. Der Kinase-Assay wird unter Verwendung des Sigma-Kits (siehe oben) durchgeführt. Nach der Spektrophotometrie werden die IC50-Werte der Inhibitoren mit der REGRESSION-Funktion des Statistica-Programms bestimmt. Methode Die Bestimmungen werden mit dem Cell proliferation kit II durchgeführt, der auf der kolorimetrischen Veränderung des gelben Tetrazoliumsalzes 2,3-Bis[2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl]-2H-tetrazolium-5-carbonanilid inner . basiert Salz in orangefarbenem Formazan-Farbstoff durch die Atmungskette lebensfähiger Zellen. Alle Standards und Experimente werden in Triplikaten durchgeführt.
Produktgruppe : Protein Tyrosinkinase > IGF-1R-Inhibitor
