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Molekulargewicht:
851,96 GSK1904529A ist ein selektiver Inhibitor von IGF-1R und IR mit IC50 von 27 nM und 25 nM, >100-fach selektiver für IGF-1R/InsR als Akt1 /2, Aurora A/B,B-Raf, CDK2, EGFR etc.
Biologische Aktivität GSK1904529A ist ein reversibler, ATP-kompetitiver Inhibitor und hat Enzym-Inhibitor-Bindungswerte gegen IGF-1R und IR mit Ki von 1,6 nM und 1,3 nM bzw. GSK1904529A hemmt wirksam die Ligand-induzierte Phosphorylierung von IGF-1R und IR bei Konzentrationen über 0,01 μM, gefolgt von einer Blockierung der nachgeschalteten Signalübertragung (AKT, IRS-1 und ERK). GSK1904529A hemmt wirksam NIH-3T3/LISN-, TC-71-, SK-N-MC-, SK-ES-RD-ES-Zellen mit IC50 von 60 nM, 35 nM, 43 nM, 61 nM bzw. 62 nM. GSK1904529A hemmt auch andere multiple Myelom- und Ewing-Sarkom-Zelllinien, einschließlich NCI-H929, MOLP-8, LP-1 und KMS-12-BM usw. GSK1904529A induziert den Zellzyklusarrest in der G1-Phase in den Zelllinien COLO 205, MCF-7, und NCI-H929, die gegenüber GK1904529A empfindlich sind. GSK1904529A zeigt eine 98%ige Hemmung des Tumorwachstums bei NIH-3T3/LISN-Tumor-tragenden Mäusen bei einer Dosis von 30 mg/kg (oral, zweimal täglich) und 75% bei COLO 205-Xenotransplantat-Mäusen (einmal täglich). Unter den HT29- und BxPC3-Xenotransplantaten erzeugt GSK1904529A eine moderate Tumorwachstumshemmung ohne Nebenwirkungen bei einer Dosis von 30 mg/kg. Inzwischen zeigt GSK1904529A minimale Auswirkungen auf den Blutzuckerspiegel. GSK1904529A (~3,5 μM im Blut) hemmt die IGF-1R-Phosphorylierung vollständig. GSK1904529A wurde mit der Behandlung verschiedener IGF-1R-abhängiger Tumoren in Verbindung gebracht, einschließlich Prostata-, Dickdarm-, Brust-, Bauchspeicheldrüsen-, Eierstock- und Sarkomen.
Kinase-Assays GSK1904529A wird in DMSO als Stammlösung bei 10 mM gelöst. Baculovirus-exprimierte Glutathion-S-Transferase-markierte Proteine, die für die intrazelluläre Domäne von IGF-1R (Aminosäuren 957-1367) und IR (Aminosäuren 979-1382) kodieren, werden zur Bestimmung von IC50 verwendet. Kinasen werden durch Vorinkubieren des Enzyms (2,7 μM Endkonzentration) in 50 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 0,1 mg/ml Rinderserumalbumin und 2 mM ATP aktiviert. GSK1904529A wird in DMSO verdünnt und auf die Assayplatten verteilt (100 nl/Vertiefung). Kinasereaktionen enthielten (in 10 µl) 50 mM HEPES (pH 7,5), 3 mM DTT, 0,1 mg/ml Rinderserumalbumin, 1 mM CHAPS, 10 mM MgCl2, 10 µM ATP, 500 nM Substratpeptid (Biotin-AminohexylAEEEEYMMMMAKKK-NH2; QPC) und 0,5 nM aktiviertes Enzym. Reaktionen werden nach 1 Stunde bei Raumtemperatur mit 33 µM EDTA gestoppt. Die Peptidphosphorylierung wird durch zeitaufgelösten Fluoreszenzresonanzenergietransfer mit 7 nM Streptavidin Surelight Allophycocyanin und 1 nM Europium-konjugierten Phosphotyrosin-Antikörpern gemessen. Platten werden in einem Multilabel-Reader gelesen.
Methode
Zellen werden in 96-Well-Platten ausgesät und über Nacht bei 37 °C inkubiert und 72 Stunden lang mit verschiedenen Konzentrationen von GSK1904529A behandelt. Für das NIH-3T3/LISN werden Zellen auf kollagenbeschichteten 96-Well-Gewebekulturplatten ausgesät und 24 Stunden anhaften gelassen. Das Gewebekulturmedium wird durch serumfreies Medium ersetzt und die Zellen werden 2 Stunden mit DMSO oder GSK1904529A behandelt. IGF-I (30 ng/ml) wird zugegeben und die Zellen werden 72 Stunden bei 37 °C inkubiert. Die Zellproliferation wird mit dem CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay quantifiziert. IC50-Werte werden bestimmt.
Produktgruppe : Protein Tyrosinkinase > IGF-1R-Inhibitor
