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Molekulargewicht:
472,58 Pacritinib (SB1518) ist ein potenter und selektiver Inhibitor von Janus Kinase 2 (JAK2) und Fms-Like Tyrosine Kinase-3 (FLT3) mit IC50s von 23 und 22 nM bzw. Phase 3.
Biologische Aktivität Pacritinib ist ein potenter Inhibitor sowohl der Wildtyp-JAK2- als auch der JAK2V617F-Mutante (IC50 = 19 nM), die bei Patienten mit MPD mit hoher Häufigkeit vorkommt. Im Vergleich zu JAK2 ist Pacritinib gegenüber TYK2 zweifach weniger wirksam (IC50 = 50 nM), gegenüber JAK3 23-fach weniger wirksam (IC50 = 520 nM) und gegenüber JAK1 56-fach weniger wirksam (IC50 = 1280 nM). Pacritinib dringt effektiv in die Zellen ein, um Signalwege stromabwärts von JAK2 zu modulieren, unabhängig davon, ob es sich um Agonisten oder Mutationen handelt. Pacritinib induziert Apoptose, Zellzyklusarrest und antiproliferative Wirkungen in JAK2WT- und JAK2V617F-abhängigen Zellen. Pacritinib hemmt die Zellproliferation von Karpas 1106P und Ba/F3-JAK2V617F mit einer IC50 von 348 bzw. 160 nM. Pacritinib hemmt das endogene Koloniewachstum, das von erythroiden und myeloischen Vorläufern mit einer IC50 von 63 bzw. 53 nM stammt. SB1518 hemmt auch FLT3 und seine Mutante FLT3-D835Y (IC50 = 6 nM). Pacritinib hemmt die FLT3-Phosphorylierung und die nachgelagerten STAT-, MAPK- und PI3K-Signalwege in FLT3-internen Tandemduplikation (ITD), FLT3-wt-Zellen und primären AML-Blastenzellen. Die Behandlung mit Pacritinib führt zu einer dosisabhängigen Abnahme von pFLT3, pSTAT5, pERK1/2 und pAkt bei FLT3-ITD, die MV4-11-Zellen mit IC50 von 80, 40, 33 bzw. 29 nM beherbergen. Die Behandlung der primären AML-Blastenzellen mit Pacritinib über 3 h führt zu einer dosisabhängigen Abnahme von pFLT3, pSTAT3 und pSTAT5 mit einer IC50 unter 0,5 µM. Pacritinib induziert Apoptose, Zellzyklusarrest und antiproliferative Wirkungen in FLT3-mutanten und FLT3-wt-Zellen. Pacritinib hemmt die Zellproliferation von FLT3-ITD-tragenden Zellen MV4-11 und primären AML-Blastenzellen mit IC50-Werten von 47 nM bzw. 0,19-1,3 µM. Pacritinib in einer Dosierung von 150 mg/kg p.o.q. in einem JAK2V617F-abhängigen Xenotransplantat-Modell verbessert die Splenomegalie- und Hepatomegalie-Symptome signifikant, mit 60 % Normalisierung des Milzgewichts und 92 % Normalisierung des Lebergewichts und wird ohne signifikanten Gewichtsverlust oder hämatologische Toxizitäten, einschließlich Thrombozytopenie und Anämie. Pacritinib induziert eine dosisabhängige Hemmung des Tumorwachstums des JAK2V617F-abhängigen SET-2-Xenograft-Modells (40 % für 75 mg/kg und 61 % für 150 mg/kg). Pacritinib ist in FLT3-ITD-tragenden MV4-11-Xenotransplantatmodellen wirksam. Pacritinib, das an 21 aufeinanderfolgenden Tagen einmal täglich behandelt wird, induziert eine dosisabhängige Hemmung des Tumorwachstums (38 % für 25 mg/kg, 92 % für 50 mg/kg und 121 % für 100 mg/kg). Eine vollständige Regression wird bei 3/10 und 8/8 Mäusen für die 50 bzw. 100 mg/kg/Tag-Gruppen beobachtet.
Kinase-Aktivitätsassays Alle Assays werden in weißen 384-Well-Mikrotiterplatten durchgeführt. Verbindungen werden in 8 Schritten 4-fach seriell verdünnt, beginnend mit 10 µM. Das Reaktionsgemisch bestand aus 25 µl Assaypuffer (50 mM HEPES pH 7,5, 10 mM MgCl2, 5 mM MnCl2, 1 mM DTT, 0,1 mM Na3VO4, 5 mM β-Glycerinphosphat). Für FLT3-Assays enthält die Reaktion 2,0 µg/ml FLT3-Enzym, 5 µM Poly(Glu,Tyr)-Substrat und 4 µM ATP. Für JAK1-Assays enthält die Reaktion 2,5 µg/ml JAK1-Enzym, 10 µM Poly(Glu,Ala,Tyr)-Substrat und 1,0 µM ATP. Für JAK2-Assays enthielt die Reaktion 0,35 &mgr;g/ml JAK2-Enzym, 10 &mgr;M Poly-(Glu,Ala,Tyr)-Substrat und 0,15 &mgr;M ATP. Für JAK3-Assays enthielt die Reaktion 3,5 &mgr;g/ml JAK3-Enzym, 10 &mgr;M Poly-(Glu,Ala,Tyr)-Substrat und 6,0 &mgr;M ATP. Für TYK2-Assays enthielt die Reaktion 2,5 μg/ml TYK2-Enzym, 10 μM Poly-(Glu,Ala,Tyr)-Substrat und 0,15 μM ATP. Die Reaktion wird 2 h bei Raumtemperatur inkubiert, bevor 13 μL PKLight®-Nachweisreagenz zugegeben wird. Nach 10 min Inkubation werden Lumineszenzsignale auf einem Multi-Label-Plattenleser gelesen.
Produktgruppe : Epigenetik > JAK-Inhibitor
