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Molekulargewicht:
509.67 TG101209 ist ein selektiver JAK2-Inhibitor mit einer IC50 von 6 nM, weniger wirksam gegenüber Flt3 und RET mit einer IC50 von 25 nM und 17 nM, ~30-fach selektiv für JAK2 als JAK3, empfindlich gegenüber JAK2V617F- und MPLW515L/K-Mutationen.
Biologische Aktivität TG101209 ist ein oral bioverfügbarer, niedermolekularer, ATP-kompetitiver Inhibitor gegen mehrere Tyrosinkinasen. TG101209 hemmt das Wachstum von Ba/F3-Zellen, die JAK2V617F- oder MPLW515L-Mutationen mit einer IC50 von B200 nM exprimieren. In einer humanen JAK2V617F-exprimierenden akuten myeloischen Leukämie-Zelllinie induziert TG101209 den Zellzyklusarrest und die Apoptose und hemmt die Phosphorylierung von JAK2V617F, STAT5 und STAT3. TG101209 unterdrückt das Wachstum hämatopoetischer Kolonien aus primären Vorläuferzellen, die JAK2V617F- oder MPL515-Mutationen beherbergen. TG101209 reduziert die STAT5-Phosphorylierung signifikant, ohne die Gesamtmenge an STAT5-Protein zu beeinträchtigen. TG101209 hemmt Survivin und reduziert die Phosphorylierung von STAT3 in HCC2429- und H460-Lungenkrebszellen. TG101209 führt in vitro zur Radiosensibilisierung von HCC2429- und H460-Lungenkrebszellen. Eine kürzlich durchgeführte Studie zeigt, dass TG101209 die BCR-JAK2- und STAT5-Phosphorylierung aufhebt, die Bcl-xL-Expression verringert und die Apoptose von transformierten Ba/F3-Zellen auslöst. 100 mg/kg TG101209 verlängern effektiv das Überleben bei JAK2V617F-induzierter Krankheit (10 Tage). Im Vergleich zu mit Placebo behandelten Tieren zeigen mit TG101209 behandelte Tiere eine statistisch signifikante, dosisabhängige Verringerung der zirkulierenden Tumorzellbelastung am Tag +11 bis 20 %.
Zellfreie Kinase-Aktivitäts-Assays Die IC50-Werte für TG101209 werden unter Verwendung eines lumineszenzbasierten Kinase-Assays mit rekombinantem JAK2, VEGFR2/KDR und JAK3 von Upstate Cell Signaling Solutions bestimmt. Kinasereaktionen werden in einem Puffer bestehend aus 40 mM Tris-Puffer (pH 7,4), 50 mM MgCl2, 800 µM EGTA, 350 µM Triton X-100, 2 µM -Mercaptoethanol, 100 µM Peptidsubstrat und einem geeigneten Menge an JAK2, VEGFR2/KDR oder JAK3, so dass der Assay über 60 Minuten linear ist. Die Reaktion wird durch Zugabe von 10&supmin;l ATP bis zu einer Endkonzentration von 3 mM initiiert und durch Zugabe von Kinase-Glo-Reagens nach 60 Minuten beendet. Die Luciferase-Aktivität wird unter Verwendung eines Ultra 384-Instrumentensatzes für Helligkeitsmessungen quantifiziert. IC50-Werte werden aus experimentellen Daten unter Verwendung der nichtlinearen Kurvenanpassungsfunktionen der GraphPad Prism 4.0-Software abgeleitet. Die Einzelkonzentrations-Hemmungsdaten für ein Panel von 63 Kinasen werden mit dem SelectScreen TM -Dienst bestimmt. Methode Kurz gesagt werden ungefähr 2 × 103 Zellen in Mikrotiterplatten-Wells in 100 ml RPMI-1640-Wachstumsmedium mit den angegebenen Konzentrationen von TG101209 ausplattiert. Das relative Zellwachstum wird in 24-Stunden-Intervallen mit dem Cell Proliferation Kit II (XTT) gemäß den Herstellerrichtlinien quantifiziert. Nach der Inkubation werden 20 ml XTT in die Vertiefungen gegeben und 4-6 Stunden lang inkubieren gelassen. Das farbige Formazan-Produkt wird spektrophotometrisch bei 450 nm mit Korrektur bei 650 nm gemessen, und die IC50-Werte werden mit der GraphPad Prism 4.0-Software bestimmt. Die Daten werden einer nichtlinearen Regressionsfit-Analyse unterzogen und die IC50-Werte werden als die Konzentration bestimmt, die die Proliferation um 50% hemmte. Alle Experimente werden dreifach durchgeführt und die Ergebnisse auf das Wachstum unbehandelter Zellen normalisiert.
Produktgruppe : Epigenetik > JAK-Inhibitor
