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Molekulargewicht:
524,68 TG-101348 (SAR302503) ist ein selektiver Inhibitor von JAK2 mit einer IC50 von 3 nM, 35- und 334-mal selektiver für JAK2 im Vergleich zu JAK1 und JAK3. Phase 2.
Biologische Aktivität TG-101348 hemmt auch JAK2 V617F, Flt3 und Ret mit IC50 von 3 nM, 15 nM bzw. 48 nM signifikant. TG101348 hat einen ~300-fach höheren IC50 für das eng verwandte JAK3 und ist ein weniger wirksamer Inhibitor der JAK1- und TYK2-Familienmitglieder. TG101348 hemmt die Proliferation einer humanen Erythroblasten-Leukämie (HEL)-Zelllinie, die die JAK2V617F-Mutation trägt, sowie einer murinen Pro-B-Zelllinie, die humanes JAK2V617F exprimiert (Ba/F3 JAK2V617F), mit IC50 von 305 nM bzw. 270 nM. TG-101348 hemmt auch die Proliferation von parentalen Ba/F3-Zellen auf ein vergleichbares Niveau mit einer IC50 von ~420 nM. Die Behandlung mit TG101348 reduziert die STAT5-Phosphorylierung bei Konzentrationen, die den Konzentrationen entsprechen, die zur Hemmung der Zellproliferation erforderlich sind. TG101348 induziert dosisabhängig Apoptose sowohl in HEL- als auch in Ba/F3-JAK2V617F-Zellen. TG101348 zeigt keine proapoptotische Aktivität in normalen menschlichen dermalen Kontrollfibroblasten bei Konzentrationen bis zu 10 &mgr;M, und die antiproliferative IC50 gegen Fibroblasten beträgt > 5 &mgr;M. Die Behandlung mit TG101348 verringert die GATA-1-Expression, die mit dem Erythroid-Skewing der JAK2V617F+-Vorläuferdifferenzierung verbunden ist, und hemmt die STAT5- sowie die GATA-S310-Phosphorylierung. TG101348 hemmt die Proliferation von HMC-1.1 (KITV560G)-Zellen mit etwas geringerer Potenz als HMC-1.2 (KITD816V, KITV560G)-Zellen mit IC50 von 740 nM bzw. 407 nM. TG101348 hat das Potenzial zur wirksamen Behandlung von JAK2V617F-assoziierten myeloproliferativen Erkrankungen (MPD). Bei behandelten Tieren gibt es eine statistisch signifikante Verringerung des Hämatokrits und der Leukozytenzahl, eine dosisabhängige Verringerung/Eliminierung der extramedullären Hämatopoese und zumindest in einigen Fällen Hinweise auf eine Abschwächung der Myelofibrose, korreliert mit Surrogatendpunkten, einschließlich Verringerung/Eliminierung der JAK2V617F-Krankheitslast, Unterdrückung der endogenen erythroiden Koloniebildung und In-vivo-Hemmung der JAK-STAT-Signaltransduktion. Es gibt keine offensichtlichen Toxizitäten und keine Wirkung auf die T-Zellzahl. Die orale Verabreichung von TG101348 (120 mg/kg) hemmt signifikant die PV-Vorläufer-Erythroid-Differenzierung in vivo.
Zellfreie Kinase-Aktivitäts-Assays Die IC50-Werte für TG101348 werden kommerziell mit dem InVitrogen-Kinase-Profiling-Service für ein 223-Kinase-Screening bestimmt, das JAK2 und JAK2V617F umfasst, oder Carna Biosciences für das Screening aller Janus-Kinase-Familienmitglieder, einschließlich JAK1 und Tyk2. Die ATP-Konzentration wird für jede Kinase auf ungefähr den Km-Wert eingestellt. Methode Ungefähr 2 × 103 Zellen werden in Mikrotiterplatten-Wells in 100 μl RPMI-1640-Wachstumsmedium mit den angegebenen Inhibitorkonzentrationen ausplattiert. Nach 72-stündiger Inkubation mit TG101348 werden 50 µL XTT-Farbstoff in jede Vertiefung gegeben und 4 Stunden in einem CO2-Inkubator inkubiert. Das farbige Formazanprodukt wird durch Spektrophotometrie bei 450 nm mit Korrektur bei 650 nm gemessen. Die Konzentration, bei der 50 % der Wirkung (dh Hemmung der Proliferation) beobachtet werden (IC50), wird mit der Software GraphPad Prism 4.0 bestimmt. Alle Experimente werden dreifach durchgeführt und die Ergebnisse werden auf das Wachstum unbehandelter Zellen normalisiert. Die Induktion der Apoptose von EpoBa/F3-JAK2V617F-, Ba/F3p210-, HEL- und K562-Zellen wird durch DNA-Fragmentierung mit DMSO und steigenden Konzentrationen von TG101348 bestimmt.
Produktgruppe : Epigenetik > JAK-Inhibitor
