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Molekulargewicht:
412,48 BIX02188 ist ein selektiver Inhibitor von MEK5 mit einer IC50 von 4,3 nM, hemmt auch die katalytische Aktivität von ERK5 mit einer IC50 von 810 nM und hemmt nicht die eng verwandten Kinasen MEK1, MEK2 , ERK2 und JNK2.
Biologische Aktivität BIX02188 blockiert signifikant die katalytische Aktivität von MEK5 mit einer IC50 von 4,3 nM und hemmt die katalytische Aktivität von ERK5 mit einer IC50 von 0,83 μM. Es zeigt keine Aktivität gegen die eng verwandten Kinasen MEK1, MEK2, ERK1, p38α, JNK2, TGFβR1, EGFR und STK16 mit IC50-Werten von 1,8 µM für TGFβR1, 3,9 µM für p38α und >6,3 µM für andere Kinasen. Die Vorbehandlung mit BIX02188 hemmt die Sorbitol-induzierte Phosphorylierung von ERK5 in HeLa-Zellen in einer dosisabhängigen Weise und zeigt keine inhibitorische Aktivität gegen die Phosphorylierung von ERK1/2-, p38- und JNK1/2-MAPKs. Die alleinige Behandlung mit BIX02188 für 24 Stunden in HeLa- oder HEK293-Zellen zeigt keine zytotoxische Wirkung. BIX02188 hemmt die transkriptionelle Aktivierung von MEF2C durch die MEK5/ERK5-Signalkaskade im aktiven MEK5/ERK5/MEF2C-gesteuerten Luciferase-Expressionssystem in HeLa- und HEK293-Zellen mit IC50-Werten von 1,15 µM bzw. 0,82 µM. BIX02188 hemmt auch die Phosphorylierung von BMK1 in bovinen mikrovaskulären Endothelzellen (BLMECs) der Lunge, die mit 300 μM H2O2 dosisabhängig mit einer IC50 von 0,8 μM stimuliert werden, und zwar durch Blockierung des MEK5-Signalwegs. BIX02188 kehrt die hemmende Wirkung auf die TNF-Vermittlung vollständig um; Die JNK-Aktivierung hatte einen ähnlichen Effekt auf die BMK1-Hemmung, was darauf hindeutet, dass sie die TNF-Signalgebung durch Aktivierung des MEK5-BMK1-Signalwegs hemmt. Protokoll (nur als Referenz) Kinase-Assay: [1]
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Catalytic assay
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MEK5 protein isolated from a baculovirus expression system is used to measure kinase activity utilizing PKLight ATP Detection Reagent. The assay is performed using 15 nM GST-MEK5 and 0.75 μM ATP in assay buffer consisting of 25 mM Hepes, pH 7.5, 10 mM MgCl2, 50 mM KCl, 0.2% BSA, 0.01% CHAPS, 100 μM Na3VO4, 0.5 mM DTT and 1% DMSO in the presence of varying concentrations of BIX02188. The kinase reaction mixture is incubated for 90 minutes at room temperature followed by addition of 10 μL of an ATP detection reagent for 15 minutes. The relative light unit (RLU) signal is measured and the RLU signals are converted to percent of control (POC) values for the determination of IC50 value.
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Zellassay: [1]
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Cell lines
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HeLa cells
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Concentrations
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Dissolved in DMSO, final concentration ~10 μM
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Incubation Time
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Pretreatment for 1.5 hours
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Method
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The cells are serum starved for 20 hours prior to stimulation with sorbitol at a final concentration of 0.4 M for 20 minutes at 37 °C. BIX02188 is added 1.5 hours prior to the addition of sorbitol. The cells are harvested and lysed in 50 μL RIPA buffer containing Halt protease and phosphate inhibitors at 4 °C for 5-10 minutes. The lysates are centrifuged for 10 minutes at 14,000 rpm and 50 μL lysate is added to 50 μl 2× sample buffer and boiled for 4 minutes at 95 °C. A 20 µl sample is run on SDS–PAGE 10% Tris-glycine gels and transferred to nitrocellulose. Western blotting is done with appropriate antibodies.
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Umrechnung verschiedener Modelltiere basierend auf BSA (Wert basierend auf Daten aus FDA Draft Guidelines)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
|
0.025
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0.02
|
0.007
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Km factor
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20
|
20
|
12
|
12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Um beispielsweise die Resveratrol-Dosis für eine Maus (22,4 mg/kg) auf eine Dosis basierend auf dem BSA für eine Ratte zu ändern, multiplizieren Sie 22,4 mg/kg mit dem Km-Faktor für eine Maus und dividieren Sie dann durch den Km-Faktor für eine Ratte. Diese Berechnung ergibt eine Ratten-Äquivalentdosis für Resveratrol von 11,2 mg/kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Chemische Informationen
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Molecular Weight (MW)
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412.48
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Formula
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C25H24N4O2
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CAS No.
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1094614-84-2
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Storage
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3 years -20℃Powder
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6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
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Synonyms
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Solubility (25°C) *
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In vitro
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DMSO
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43 mg/mL
(104.24 mM)
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Water
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<1 mg/mL
(
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Ethanol
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3 mg/mL
(7.27 mM)
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In vivo
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30% PEG400/0.5% Tween80/5% propylene glycol
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30 mg/mL
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* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Chemical Name
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(Z)-3-((3-((dimethylamino)methyl)phenylamino)(phenyl)methylene)-2-oxoindoline-6-carboxamide
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Molaritätsrechner Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner
Produktgruppe : MAPK > MEK-Inhibitor
