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Molekulargewicht:
321,37 ME0328 ist ein potenter und selektiver PARP-Inhibitor mit einer IC50 von 0,89 μM für PARP3, etwa 7-fache Selektivität gegenüber PARP1.
Biologische Aktivität ME0328 ist löslich, zelldurchlässig und metabolisch stabil in menschlichen Lebermikrosomen und Rattenhepatozyten. ME0328 (10 μM) führt zu einer signifikanten Verzögerung der Auflösung von γH2AX-Foci durch Beeinflussung von ARTD3 in A549- und MRC5-Zellen ohne signifikante Toxizität. Enzymatische Assays Die Protein-ADP-Ribosylierung wird unter Verwendung von Hexahistidin-markierten ARTD-Proteinen und rekombinanten Histonproteinen gemessen, die auf 96-Well-Ni2+-chelatisierenden Platten (5-PRIME) eingefangen wurden. ADP-Ribosylierungsreaktionen werden durch Zugabe von NAD+ (2% biotinyliert) initiiert und modifizierte Reaktionsprodukte werden durch Chemilumineszenz nachgewiesen. Die Km-Werte werden anhand von Diagrammen der Anfangsraten gegen die NAD+-Konzentrationen und der linearen Kurvenanpassung mit GraphPad Prism geschätzt. Alle Verbindungen werden in Dimethylsulfoxid (DMSO) bis zu einer Stammkonzentration von 50 mM gelöst. Experimente zur Bestimmung von IC50-Werten werden mit Verbindungskonzentrationen im Bereich zwischen 10 nM und 450 µM mit einer DMSO-Konzentration von 1% (v/v) durchgeführt. Die Messungen werden bei einer NAD+-Konzentration unter Km für jede Transferase durchgeführt. IC50-Werte werden durch Kurvenanpassung mit GraphPad Prism geschätzt. Die angegebenen Werte stellen Mittelwerte ± SE der Kurvenanpassungen basierend auf doppelten oder dreifachen Experimenten dar, die jeweils basierend auf drei Wiederholungen bestimmt wurden. Methode
Die Zytotoxizität der Verbindung in A549- und MRC5-Zellen wird unter Verwendung von WST-1-Assays bewertet. A549-Zellen werden in Dulbecco's Modified Eagle's Medium, ergänzt mit 10 % fötalem Kälberserum (FCS), Penicillin und Streptomycin, kultiviert. MRC5-Zellen werden in Minimal Essential Medium, ergänzt mit 10 % FCS, Penicillin, Streptomycin und L-Glutamin, kultiviert. Beide Zelllinien werden in einem befeuchteten Inkubator bei 37 °C und 5 % CO2 gehalten.
Produktgruppe : Epigenetik > PARP-Inhibitor
