Molekulargewicht: 266,29 Tyrphostin AG 1296 ist ein Inhibitor von PDGFR mit IC50 von 0,3-0,5 μM, keine Aktivität gegenüber EGFR.
Biologische Aktivität AG 1296 hemmt selektiv die PDGF-Rezeptorkinase und die PDGF-abhängige DNA-Synthese in Schweizer 3T3-Zellen und in Schweinen Aorta-Endothellzellen mit 50 % Hemmkonzentrationen unter 5 bzw. 1 μM. AG1296 hemmt FGFR und c-Kit mit IC50 von 12,3 μM und 1,8 μM in Swiss 3T3-Zellen. AG1296 hemmt stark die Signalübertragung von humanen PDGF-α- und -β-Rezeptoren, hat jedoch keine Wirkung auf die Autophosphorylierung des VEGFR-KDR oder auf die durch VEGF induzierte DNA-Synthese in Schweineaorten-Endothelzellen.
Die Behandlung durch AG1296 kehrt den transformierten Phänotyp von sis-transfizierten NIH3T3-Zellen um, hat jedoch keine Wirkung auf src-transformierte NIH3T3-Zellen. AG1296 ist ein ATP-kompetitiver Inhibitor. AG1296 stört weder die PDGF-Bindung noch die PDGF-Rezeptor-Dimerisierung, während es die PDGF-Rezeptor-Autophosphorylierung aufhebt. Somit ist AG1296 ein reiner Inhibitor der katalytischen Aktivität der Rezeptor-Tyrosinkinase. Membran-Autophosphorylierungsassays Membranen werden aus konfluenten Kulturen von Swiss 3T3-Zellen wie beschrieben hergestellt. Zur Messung der Rezeptorautophosphorylierung werden 10 µg Membranprotein pro Assay für 20 min auf Eis in Gegenwart von 1,2 µg/ml EGF oder 2 µg/ml PDGF oder beidem inkubiert; 50 mM Hepes (pH 7,5); und 3 mM MnCl2 in einem Volumen von 45μl. Um die Wirkung von Tyrphostinen zu testen, werden diese in einem Volumen von 0,5 µl (in DMSO; Endkonzentration 0,5 %) 15 min vor Zugabe der Wachstumsfaktoren zugegeben.
Die Phosphorylierung wird durch Zugabe von [γ-32P]ATP initiiert und nach 2 min durch Zugabe von 10 μL einer Lösung mit 6% SDS, 30% β-Mercatoethanol, 40% Glycerin und 0,5 mg/ml Bromphenolblau beendet. Die Proben werden 5 min bei 95 °C erhitzt und einer SDS-PAGE unter Verwendung von 10% Acrylamidgelen unterzogen. Die Gele werden gefärbt und getrocknet und einer autoradiographischen Analyse unterzogen. Umrechnung verschiedener Modelltiere basierend auf BSA (Wert basierend auf Daten aus FDA Draft Guidelines)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
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0.025
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0.02
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0.007
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Km factor
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20
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20
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12
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12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Um beispielsweise die Resveratrol-Dosis für eine Maus (22,4 mg/kg) auf eine Dosis basierend auf dem BSA für eine Ratte zu ändern, multiplizieren Sie 22,4 mg/kg mit dem Km-Faktor für eine Maus und dividieren Sie dann durch den Km-Faktor für eine Ratte. Diese Berechnung ergibt eine Ratten-Äquivalentdosis für Resveratrol von 11,2 mg/kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Produktgruppe : Protein Tyrosinkinase > PDGFR-Inhibitor
