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Molekulargewicht: 488,74 PIK-75 ist ein p110α-Inhibitor mit einer IC50 von 5,8 nM (200-fach stärker als p110β), isoformspezifischen Mutanten bei Ser773 und hemmt auch stark DNA-PK mit IC50 von 2 nM.
PIK-75 zeigt die beeindruckende Wirksamkeit und Isoformselektivität bei p110α, während die entsprechenden IC50-Werte 1300 nM, 76 nM und 510 nM für andere PI3K-Isoformen p110β, -γ bzw. -δ betragen. Darüber hinaus ist PIK-75, wenn es an gereinigtes p110α bindet, ein nicht-kompetitiver Inhibitor in Bezug auf ATP mit einem Ki von 36 nM und kompetitiv in Bezug auf das Substrat PI mit einem Ki von 2,3 nM. PIK-75 zeigt auch eine starke Hemmung der DNA-PK. PIK-75 (1 μM) reduziert das Zellüberleben, indem es die mitochondriale Aktivität in nicht stimulierten nicht-asthmatischen glatten Muskelzellen (ASM), asthmatischen ASM-Zellen und Lungenfibroblasten signifikant verringert. Während PIK75 in TGFβ-stimulierten ASM-Zellen nur die mitochondriale Aktivität in asthmatischen Zellen verringert, ohne Auswirkungen auf nicht-asthmatische Zellen. Eine aktuelle Studie zeigt, dass PIK-75 (10 nM) die TNF-α-induzierte CD38-mRNA-Expression hemmt und die TNF-α-induzierte ADP-Ribosylcyclase-Aktivität in glatten Muskelzellen der menschlichen Atemwege signifikant abschwächt.
Im ErbB3WT-Tumormodell reduziert PIK-75 in vitro die chemotaktische Reaktion auf HRGβ1 und senkt den pAkt-Spiegel um 40 %. Außerdem reduziert PIK-75 signifikant die Motilität von Tumorzellen und die In-vivo-Invasion in ErbB3WT-Primärtumoren. [5] Bei männlichen CD1-Mäusen führt PIK-75 zu schwerwiegenden Beeinträchtigungen im Insulintoleranztest (ITT) und Glukosetoleranztest (GTT) sowie zu einer Erhöhung der Glukoseproduktion während eines Pyruvattoleranztests (PTT). Protokoll (nur als Referenz) Kinase-Assay: [1]
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Inhibition Assays
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The PI3K inhibitor PIK-75 is dissolved at 10 mM in dimethyl sulfoxide and stored at −20°C until use. PI3K enzyme activity is determined in 50 μL of 20 mM HEPES, pH 7.5, and 5 mM MgCl2 containing 180 μM phosphatidyl inositol, with the reaction started by the addition of 100 μM ATP (containing 2.5 μCi of [γ-32P]ATP). After a 30-minute incubation at room temperature, the enzyme reaction is stopped by the addition of 50 μL of 1 M HCl. Phospholipids are then extracted with 100 μL of chloroform/methanol [1:1 (v/v)] and 250 μL of 2 M KCl followed by liquid scintillation counting. Inhibitors are diluted in 20% (v/v) dimethyl sulfoxide to generate a concentration versus inhibition of enzyme activity curve, which is then analyzed with the use of Prism version 5.00 for Windows to calculate the IC50. For kinetic analysis, a luminescent assay measuring ATP consumption is used. PI3K enzyme activity is determined in 50 μL of 20 mM HEPES, pH 7.5, and 5 mM MgCl2 with PI and ATP at various concentrations. After a 60-minute incubation at room temperature, the reaction is stopped by the addition of 50 μL of Kinase-Glo followed by a further 15-minute incubation. Luminescence is then read using a Fluostar plate reader. Results are analyzed using Prism.
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Zellassay: [3]
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Cell lines
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A2780, A2780/cp70, 2780AD, HCT116, HT29, WIL, CALU-3, MCF7, PC3 and HS852 cells
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Concentrations
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0-10 μM
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Incubation Time
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48 hours
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Method
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Mitochondrial activity is assessed after stimulation with TGFβ with or without inhibitors for 48 hours using the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium (MTT) assay. Harvested washed cells are resuspended in DMEM-lO% FCS and aliquoted (500 μL) into 24-well cluster plates prior to serial dilution (1:2) in duplicates. To each well, 100 μL of an appropriate MTT concentration (dissolved in PBS and filtered through a 0.2 μm filter before use to remove any blue formazan product) is added immediately after diluting the cells, which are then incubated for 3.5 hours at 37 °C. The resulting blue formazan product is solubilized overnight (16 hours) at 37 °C by the addition of 500 μL of 10% sodium dodecyl sulfate (SDS) in 0.01 M HCl to each well. A sample (150 μL) from each duplicate well is transferred to a 96-well microplate, and the optical density determinedby automated spectrophotometry against a reagent blank (no cells). Absorbance is measured at a test wavelength of 570 nm and a reference wavelength of 690 nm. For each primary cell culture, results from three to six wells from each treatment are averaged, and data are expressed as absorbance 570 to 690 nm.
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Tierstudie: [5]
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Animal Models
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MTLn3 cells are injected into the right fourth mammary fat pad from the head of female severe-combined immunodeficient/NCr mice.
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Formulation
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PIK-75 is dissolved in DMSO and then diluted in PBS.
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Dosages
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≤1 μM
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Administration
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Administered via i.p.
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Umrechnung verschiedener Modelltiere basierend auf BSA (Wert basierend auf Daten aus FDA Draft Guidelines)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
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0.025
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0.02
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0.007
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Km factor
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20
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20
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12
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12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Um beispielsweise die Resveratrol-Dosis für eine Maus (22,4 mg/kg) auf eine Dosis basierend auf dem BSA für eine Ratte zu ändern, multiplizieren Sie 22,4 mg/kg mit dem Km-Faktor für eine Maus und dividieren Sie dann durch den Km-Faktor für eine Ratte. Diese Berechnung ergibt eine Ratten-Äquivalentdosis für Resveratrol von 11,2 mg/kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Chemische Informationen
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Molecular Weight (MW)
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488.74
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Formula
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C16H14BrN5O4S.HCl
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CAS No.
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372196-77-5
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Storage
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3 years -20℃Powder
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6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
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Synonyms
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Solubility (25°C) *
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In vitro
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DMSO
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3 mg/mL
(6.13 mM)
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Water
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<1 mg/mL
(
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Ethanol
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<1 mg/mL
(
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* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Chemical Name
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(E)-N'-((6-bromoH-imidazo[1,2-a]pyridin-3-yl)methylene)-N,2-dimethyl-5-nitrobenzenesulfonohydrazide hydrochloride
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Molaritätsrechner Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner
Produktgruppe : PI3K/Akt/mTOR > PI3K-Inhibitor
