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Molekulargewicht: 428,43 Wortmannin ist der erste beschriebene PI3K-Inhibitor mit einer IC50 von 3 nM, mit geringer Selektivität innerhalb der PI3K-Familie. Blockiert auch die Bildung von Autophagosomen und hemmt wirksam DNA-PK/ATM mit IC50 von 16 nM und 150 nM.
Die Hemmung von MLCK durch Wortmannin wird durch Calmodulin oder Peptidsubstrat nicht beeinflusst, während sie durch eine hohe ATP-Konzentration reduziert wird. Wortmannin interagiert direkt mit der katalytischen Domäne von MLCK und führt zu einem irreversiblen Verlust der Enzymaktivität. Wortmannin hat keine Hemmung gegenüber cAMP-abhängiger Proteinkinase, cGMP-abhängiger Proteinkinase und Calmodulin-abhängiger Proteinkinase II und hat eine geringe Wirkung auf die Proteinkinase-C-Aktivität. Wortmannin hemmt die N-Formylmethionyl-leucylphenylalanin (fMLP)-stimulierte PtdInsP3 (Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphat)-Bildung mit einer IC50 von 5 nM und diese Hemmung wird bei Vorbehandlung mit 100 nM Wortmannin in menschlichen Neutrophilen mit erhöhten PtdInsP2-Spiegeln und keine Auswirkungen auf den zellulären PtdInsP- und PtdIns-Gehalt. Wortmannin könnte oszillatorische Veränderungen des F-Aktin-Gehalts entwickeln und hemmt die fMLP-stimulierte Aktin-Polymerisation in Neutrophilen nicht. Wortmannin hemmt irreversibel die Aktivität der Phosphatidylinositol-3-Kinase (PI3-Kinase) mit Bindung an das 110-kDa-Protein (IC50 von 3 nM) und hat keine Wirkung auf die PI4-Kinase in RBL-2H3-Zellen. Wortmannin hemmt auch sowohl die Fc-epsilon-RI-vermittelte Histamin-Sekretion als auch die Leukotrien-Freisetzung, ohne die Aktivierung der Tyrosinkinase Lyn zu beeinflussen. Wortmannin beseitigt die insulininduzierte Hexose-Aufnahme in isolierten Ratten-Adipozyten bei 0,1 μM vollständig, ohne die Isoproterenol-stimulierte lipolytische Aktivität zu beeinträchtigen. Wortmannin unterdrückt die insulininduzierte Produktion von Stickstoffmonoxid um 50 % bei 500 nM in menschlichen Nabelvenen-Endothelzellen, die auf IGF-1 reagieren. Wortmannin unterdrückt die DNA-Doppelstrangbruch-(DSB)-Reparatur und hat keinen Einfluss auf die DSB-Spiegel oder die Kinetik der Einzelstrangbruch-(SSB)-Reparatur in Ovarialzellen des chinesischen Hamsters bei 50 μM. Wortmannin könnte die durch ionisierende Strahlung (IR) induzierte Zytotoxizität ohne Toxizität selbst verstärken. Wortmannin hemmt die polo-like Kinase (PLK1)-Aktivität IC50 von 24 nM in intakten G2/M-arrestierten Zellen. Wortmannin erhöht die Toll-like-Rezeptor (TLR)-vermittelte Akkumulation von IL-6 in menschlichen Makrophagen mit einer EC50 von 50 nM. Inzwischen erhöht Wortmannin signifikant die TLR-vermittelte induzierbare Stickoxid-Synthase (iNOS)-Expression und die Nitrit-Akkumulation in Maus-Makrophagen. Wortmannin aktiviert den nuklearen Faktor-κB und reguliert die Produktion von Zytokin-mRNA hoch. Wortmannin hemmt auch die Polo-like Kinase (PlK) 1 und PlK3, die eine wichtige Rolle bei der Mitose spielen. Eine Behandlung mit Wortmannin könnte zu einer Verringerung der Phosphorylierung von p53 auf Serin 20 führen, die durch DNA-Schäden induziert wird. Wortmannin unterdrückt die Hyaluronan-induzierte Akt-Phosphorylierung und Zellmotilität/Migration in SW1990-Zellen. Wortmannin hemmt die peritoneale Metastasierung von SW1990 bei Mäusen bei 1 mg/kg ohne Gewichtsverlust. Wortmannin hemmt die Phosphatidylinositid-3-Kinase-Proteinkinase B (PKB)/Akt-Phosphorylierung sowohl in normalen Geweben (Lungen-, Herz- und Gehirnhomogenate) als auch in Tumorgewebe bei Mäusen, ohne Mortalität oder akute Toxizität bei 0,7 mg/kg. Die Kombination mit LY188011, Wortmannin erhöht signifikant die Apoptose und hemmt das Tumorwachstum bei orthotopen Tumoren, während beide Monotherapien dies nicht konnten.
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MLCK assay
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MLCK activity is assayed with peptide substrate (KKRPQRATSNVFS-NH2) or myosin light chain. The peptide substrate (24 μM) is phosphorylated in a reaction mixture containing 25 mM Tris-HC1 (pH 7.5), 0.5 mg/mL bovine serum albumin, 4 mM MgCl2, 0.5 mM CaCl2, 2.6 nM calmodulin, 1.5 nM MLCK, and 400 μM ATP in a final volume of 0.25 mL. After a 10-min preincubation at 28 ºC without ATP, the reaction is started by addition of ATP at 28 ºC and terminated by the addition of 0.1 mL of 10% (v/v) acetic acid after 30 min. The mixture is analyzed by high performance liquid chromatography: column, Unisil Pack 5C18 4.6 X 150 mm; solvent, 18% (v/v) acetonitrile, 0.1% (v/v) trifluoroacetic acid in water; flow rate, 1.0 mL/min; temperature, 40 ºC; detection, absorbance at 220 nm. Percent of reaction is calculated from the ratio of peak areas of phosphorylated form to those of unphosphorylated form. Specific activity measured under the conditions described above is 0.81 μmol/min/mg. Myosin light chain (108 μg/mL) is phosphorylated in a reaction mixture containing 25 mM Tris-HC1 (pH 7.5), 0.5 mg/mL bovine serum albumin, 4 mM MgCl2, 0.5 mM CaCl2, 4.2 nM calmodulin, 0.92 nM enzyme, and 10 μM[γ-32P]ATP (100-900 cpm/pmol) in a final volume of 0.25 mL. After a 3-min preincubation at 30 ºC without ATP, the reaction is started by the addition of [γ-32P]ATP at 30 ºC and stopped by the addition of 0.125 mL of trichloroacetic acid after 5 min. The acid-precipitable materials are collected on a nitrocellulose membrane filter and washed with four 1-mL aliquots of 5% (v/v) trichloroacetic acid. The radioactivity on the filter is measured in a toluene scintillation fluid, using a Packard Tri-Carb liquid scintillation spectrometer Model 4530. The specific activity measured under the conditions is 1.23 μmol/min/mg. [1]
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PI3K assay
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In an ordinary solution assay, partially purified PI3-kinase from calf thymus is used at a final concentration of 20 ng/mL. In the case of immunocomplex assay, P13-kinase activity is measured in immunoprecipitates with anti-PI3-kinase p85 antiserum, anti-
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Tierstudie: [11]
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Animal Models
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Human pancreatic adenocarcinoma cells PK1 are injected both s.c. and orthotopically into SCID mice.
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Formulation
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Dissolved at 0.4 mg/mL in DMSO, and diluted with 0.9% NaCl before use
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Dosages
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0.175, 0.35, and 0.7 mg/kg
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Administration
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Injected by i.v.
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Solubility
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1% DMSO/30% polyethylene glycol/1% Tween 80,
8 mg/mL
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* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Umrechnung verschiedener Modelltiere basierend auf BSA (Wert basierend auf Daten aus FDA Draft Guidelines)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
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0.025
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0.02
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0.007
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Km factor
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20
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20
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12
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12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Um beispielsweise die Resveratrol-Dosis für eine Maus (22,4 mg/kg) auf eine Dosis basierend auf dem BSA für eine Ratte zu ändern, multiplizieren Sie 22,4 mg/kg mit dem Km-Faktor für eine Maus und dividieren Sie dann durch den Km-Faktor für eine Ratte. Diese Berechnung ergibt eine Ratten-Äquivalentdosis für Resveratrol von 11,2 mg/kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Chemische Informationen
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Molecular Weight (MW)
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428.43
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Formula
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C23H24O8
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CAS No.
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19545-26-7
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Storage
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3 years -20℃Powder
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6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
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Synonyms
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Solubility (25°C) *
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In vitro
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DMSO
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86 mg/mL
(200.73 mM)
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Water
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<1 mg/mL
(
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Ethanol
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<1 mg/mL
(
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In vivo
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1% DMSO/30% polyethylene glycol/1% Tween 80
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8 mg/mL
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* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Chemical Name
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3H-Furo[4,3,2-de]indeno[4,5-h]-2-benzopyran-3,6,9-trione, 11-(acetyloxy)-1,6b,7,8,9a,10,11,11b-octahydro-1-(methoxymethyl)-9a,11b-dimethyl-, (1S,6bR,9aS,11R,11bR)-
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Molaritätsrechner Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner
Produktgruppe : PI3K/Akt/mTOR > PI3K-Inhibitor
