.cp_wz Tabelle {border-top: 1px solid #ccc;border-left:1px solid #ccc; } .cp_wz Tabelle td{border-right: 1px solid #ccc; Rahmen unten: 1px solid #ccc; Padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {Rand-rechts: 1px Solid #ccc;Rand-Bottom: 1px Solid #ccc; Polsterung: 5px 0px 0px 5px;}
Molekulargewicht: 390,41 PF-4708671 ist ein zelldurchlässiger Inhibitor der ribosomalen S6-Kinase p70 (S6K1-Isoform) mit Ki/IC50 von 20 nM/160 nM, 400-fach höherer Selektivität für S6K1 als S6K2 und 4- bzw. >20-fache Selektivität für S6K1 als MSK1 bzw. RSK1/2. Erster gemeldeter S6K1-spezifischer Inhibitor.
PF-4708671 ist ein Piperazinyl-Pyrimidin-Analogon und der erste S6K1-spezifische Inhibitor. PF-4708671 hemmt die Aktivität der eng verwandten S6K2-Isoform oder einer Reihe anderer AGC-Kinasen (Akt1, Akt2, PKA, PKCα, PKCϵ, PRK2, ROCK2, RSK1, RSK2 oder SGK1) nicht signifikant. PF-4708671 verhindert die S6K1-vermittelte Phosphorylierung des S6-Proteins als Reaktion auf IGF-1 (insulinähnlicher Wachstumsfaktor 1), hat jedoch keinen Einfluss auf die PMA-induzierte Phosphorylierung von Substraten der hoch verwandten RSK (ribosomale S6-Kinase p90) und MSK (Mitogen- und Stress-aktivierte Kinase)-Kinasen. Es wurde auch festgestellt, dass PF-4708671 die Phosphorylierung der T-Schleife und des hydrophoben Motivs von S6K1 induziert, ein Effekt, der von mTORC1 (mTOR-Komplex 1) abhängt. PF-4708671 beeinflusst die Aktivität von mTORC1 nicht.
Protokoll (nur als Referenz) Kinase-Assay: [1]
|
Protein kinase activity assays
|
For selectivity IC50 assays, purified active GST–S6K1, GST–S6K2, His–MSK1 (residues 2–802), His–RSK1 (residues 1–735) and His–RSK2 (residues 2–740) (0.5 units/mL) are assayed for 30 min at 30 °C in a 50 μL assay mixture in buffer A containing either 30 μM Crosstide (GRPRTSSFAEG, for S6K1, S6K2 and MSK1) or 30 μM Long S6 (KEAKEKRQEQIAKRRRLSSLRASTSKSGGSQK, for RSK1 and RSK2), 10 mM magnesium acetate and 100 μM [γ- 32P]ATP. Reactions are terminated and the incorporation of [γ-32P]phosphate into the peptide substrate is determined by applying the reaction mixture on to P81 phosphocellulose paper and scintillation counting after washing the papers in phosphoric acid. One unit of activity is defined as that which catalysed the incorporation of 1 nmol of [32P]phosphate into the substrate. To determine the Ki for PF-4708671, full-length recombinant S6K1 is added to a final concentration of 5 nM to Omnia assay buffer containing various concentrations of compound. The reaction is run for 60 min at 30 °C in a 50 μL assay volume. The fluorescence of the peptide is monitored at an excitation wavelength of 360 nm and an emission wavelength of 485 nm. The rate of the reaction at each compound concentration is normalized to the DMSO control rate, and this normalized rate against concentration is fitted to the Morrison tight-binding equation for a competitive inhibitor to provide the true Ki. In order to assay S6K activity in HEK-293 cell lysates, cells are lysed in Tris lysis buffer. Lysate (0.5 mg) is incubated with 5 μg of S6K antibody conjugated to Protein G–Sepharose for 1 h at 4 °C on a vibrating platform. Immunoprecipitates are washed twice with lysis buffer and twice with buffer A, and kinase activity is assayed exactly as described above using the Crosstide peptide.
|
Umrechnung verschiedener Modelltiere basierend auf BSA (Wert basierend auf Daten aus FDA Draft Guidelines)
|
Species
|
Baboon
|
Dog
|
Monkey
|
Rabbit
|
Guinea pig
|
Rat
|
Hamster
|
Mouse
|
|
Weight (kg)
|
12
|
10
|
3
|
1.8
|
0.4
|
0.15
|
0.08
|
0.02
|
|
Body Surface Area (m2)
|
0.6
|
0.5
|
0.24
|
0.15
|
0.05
|
0.025
|
0.02
|
0.007
|
|
Km factor
|
20
|
20
|
12
|
12
|
8
|
6
|
5
|
3
|
|
Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
|
Animal B Km
|
|
Animal A Km
|
Um beispielsweise die Resveratrol-Dosis für eine Maus (22,4 mg/kg) auf eine Dosis basierend auf dem BSA für eine Ratte zu ändern, multiplizieren Sie 22,4 mg/kg mit dem Km-Faktor für eine Maus und dividieren Sie dann durch den Km-Faktor für eine Ratte. Diese Berechnung ergibt eine Ratten-Äquivalentdosis für Resveratrol von 11,2 mg/kg.
|
Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
|
mouse Km(3)
|
= 11.2 mg/kg
|
|
rat Km(6)
|
Chemische Informationen herunterladen PF-4708671 SDF
|
Molecular Weight (MW)
|
390.41
|
|
Formula
|
C19H21F3N6
|
|
CAS No.
|
1255517-76-0
|
|
Storage
|
3 years -20℃Powder
|
|
6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
|
|
Synonyms
|
|
|
Solubility (25°C) *
|
In vitro
|
DMSO
|
30 mg/mL
(76.84 mM)
|
|
Water
|
<1 mg/mL
(
|
|
Ethanol
|
8 mg/mL
(20.49 mM)
|
|
In vivo
|
30% PEG400/0.5% Tween80/5% propylene glycol
|
30 mg/mL
|
* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
|
|
Chemical Name
|
1H-Benzimidazole, 2-[[4-(5-ethyl-4-pyrimidinyl)-1-piperazinyl]methyl]-6-(trifluoromethyl)-
|
Molaritätsrechner Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner
Produktgruppe : PI3K/Akt/mTOR > S6-Kinase-Inhibitor
