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Molekulargewicht:
332,4 KW-2449 ist ein mehrfach zielgerichteter Inhibitor, hauptsächlich für Flt3 mit IC50 von 6,6 nM, mäßig potent gegenüber FGFR1, Bcr-Abl und Aurora A; geringe Wirkung auf PDGFRβ, IGF-1R, EGFR. Phase 1.
Biologische Aktivität KW-2449, ein Multikinase-Inhibitor von FLT3, ABL, ABL-T315I und Aurora-Kinase, wird zur Behandlung von Leukämiepatienten untersucht. KW-2449 zeigt die starke wachstumshemmende Wirkung auf Leukämiezellen mit FLT3-Mutationen durch Hemmung der FLT3-Kinase, was zur Herunterregulierung von phosphoryliertem FLT3/STAT5, G1-Arrest und Apoptose führt. Die orale Verabreichung von KW-2449 zeigt eine dosisabhängige und signifikante Hemmung des Tumorwachstums im FLT3-mutierten Xenotransplantatmodell mit minimaler Knochenmarksuppression. Bei FLT3-Wildtyp-Leukämie induziert KW-2449 die Reduktion von phosphoryliertem Histon H3, G2/M-Arrest und Apoptose. Bei Imatinib-resistenter Leukämie trägt KW-2449 durch die gleichzeitige Herunterregulierung von BCR/ABL und Aurora-Kinasen zur Freisetzung der Resistenz bei. Die inhibitorische Aktivität von KW-2449 wird durch die Anwesenheit von menschlichem Plasmaprotein, wie z. B. saurem α1-Glykoprotein, nicht beeinflusst. KW-2449 besitzt durch mehrere Wirkmechanismen eine starke wachstumshemmende Wirkung gegen verschiedene Arten von Leukämie. KW-2449 hat eine signifikante Aktivität und rechtfertigt eine klinische Studie bei Leukämiepatienten mit FLT3-Mutationen sowie Imatinib-resistenten Mutationen. Die Phosphorylierungsspiegel von FLT3 und STAT5 werden durch KW-2449 dosisabhängig verringert. Darüber hinaus hemmt es wirksam ABL-T315I, das mit IM-Resistenz assoziiert ist, mit einer IC50 von 4 nM. Andererseits hat KW-2449 selbst bei einer Konzentration von 1 &mgr;M eine geringe Wirkung auf PDGFRβ, IGF-1R, EGFR und verschiedene Serin/Threonin-Kinasen. KW-2449 hat die potenten wachstumshemmenden Aktivitäten nicht nur gegen FLT3/ITD-exprimierende Leukämiezellen, sondern auch gegen FLT3/KDM-aktivierte und Wildtyp-FLT3-überexprimierende Leukämiezellen. Entsprechend seiner wachstumshemmenden Wirkung unterdrückt KW-2449 dosisabhängig die Phosphorylierungen von FLT3 (P-FLT3) und seinem nachgeschalteten Molekül Phospho-STAT5 (P-STAT5) in MOLM-13-Zellen. Darüber hinaus erhöht KW-2449 den Prozentsatz an Zellen in der G1-Phase des Zellzyklus und reduziert umgekehrt den Prozentsatz an Zellen in der S-Phase, was zu einer Zunahme der apoptotischen Zellpopulation führt. KW-2449 kann konstitutiv aktive WT-FLT3-Kinase dephosphorylieren, aber nicht die Proliferation von Leukämiezellen hemmen, wenn diese nicht hauptsächlich von der FLT3-Kinase abhängig sind. KW-2449 wird schnell resorbiert und in einen Hauptmetaboliten M1 umgewandelt. Präklinische Studien zeigen, dass KW-2449 durch Monoaminoxidase-B (MAO-B) und Aldehydoxidase in seinen Hauptmetaboliten M1 umgewandelt wird.KW-2449 vermittelt Zytotoxizität durch Hemmung von FLT3/ITD.KW-2449 ist ein direkter Inhibitor von FLT3 und induziert die Hemmung seines nachgeschalteten Ziels STAT5. KW2449 interagiert synergistisch mit HDACIs, um in Ph+ CML-Zellen zeit- und konzentrationsabhängig Apoptose zu induzieren. KW2449 erhöht synergistisch die Letalität von Vorinostat/SNDX275 in CML-Zellen. Die Therapien von KW-2449 sind gegen zusätzliche IM-resistente Bcr/Abl+-Leukämiezellen aktiv. KW2449 reduziert mäßig die Phosphorylierung von Histon H3, einem Indikator für die Aurora B-Aktivität, in Nocodozol-behandelten K562-Zellen. Im MOLM-13-Tumor-Xenotransplantat-Modell zeigt die orale Verabreichung von KW-2449 für 14 Tage eine starke und signifikante Antitumorwirkung in einer dosisabhängigen Weise. Protokoll (nur als Referenz) Kinase-Assay: [2]
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FLT3 phosphorylation
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Leukemia cells are washed in phosphate-buffered saline (PBS), then lysed by resuspending the cells in lysis buffer (20 mM Tris pH 7.4, 100 mM NaCl, 1% Igepal, 1 mM EDTA, 2 mM NaVO4, plus Complete protease inhibitor KW-2449 for 30 minutes while rocking. The extract is clarified by centrifugation at 1.6 × 104 g and the supernatant is assayed for protein (Bio-Rad). A 50-μg aliquot is removed as a whole-cell lysate for analysis of STAT5, and the remainder is used for immunoprecipitation with anti-FLT3. Anti-FLT3 antibody is added to the extract for overnight incubation, then protein A sepharose is added for 2 additional hours. Separate sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide electrophoresis (SDS-PAGE) gels for whole-cell lysate and immunoprecipates are run in parallel. After transfer to Immobilon membranes, immunoblotting is performed with antiphosphotyrosine antibody (4G10) to detect phosphorylated FLT3 or, for the whole-cell lysate gels, with a rat monoclonal antibody against phosphorylated STAT5 (residue Y694) then stripped and reprobed with anti-FLT3 antibody to measure total FLT3. Proteins are visualized using chemiluminescence, exposed on Kodak BioMax XAR film, developed, and scanned using a Bio-Rad GS800 densitometer. The concentration of KW-2449 for which the phosphorylation of FLT3 or STAT5 is inhibited to 50% of its baseline (IC50) is determined using linear regression analysis of the dose response curves. For direct analysis of FLT3 and STAT5 in circulating blasts, peripheral blood is collected in heparinized tubes and promptly chilled on ice. Samples are centrifuged for 10 minutes at 900 g, at 4 °C. The plasma is removed and stored frozen at −80 °C. The buffy coat is carefully transferred to ice-cold PBS, layered onto chilled Ficoll-Hypaque, and centrifuged for 5 minutes at 600 g, at 4 °C. All subsequent steps are carried out at 4 °C. Mononuclear cells are collected and washed rapidly once in red blood cell lysis buffer (0.155 M NH4Cl, 0.01 M KHCO3, 0.1 mM EDTA), then washed once in PBS. Cells are then lysed as described for FLT3 and STAT5 analysis.
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Zellassay: [1]
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Cell lines
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MOLM-13 and RS4;11 cells
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Concentrations
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33nM, 75nM, 0.1μM, 0.3μM and 0.15μM
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Incubation Time
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24, 48, and 72 hours
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Method
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Cell viability is determined by the sodium 3′-[1-(phenylaminocarbonyl)-3, 4-tetrazolium]-bis (4-methoxy-6-nitro) benzene sulfonic acid hydrate assay after incubation with or without KW-2449 for 72 hours at 37 °C. The number of viable cells is determined using the Cell Proliferation Kit II. For cell-cycle analysis, MOLM-13 and RS4;11 cells are treated with KW-2449. After 24, 48, and 72 hours of incubation at 37 °C, DNA contents are analyzed. Cell cycle distribution of K562, TCC-Y, and TCC/Ysr is analyzed 24 hours after treatment with KW-2449 or imatinib.
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Tierstudie: [3]
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Animal Models
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CBySmn.CB17-Prkdsscid/J (BALB/C) mice are injected with BV173/E255K/Luc cl4 cells.
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Formulation
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Dissolved in 0.5% methylcellulose 400 solution.
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Dosages
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32 mg/kg/day, 5 days/week
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Administration
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Orally (p.o.) administered
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Solubility
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0.5% methylcellulose,
30 mg/mL
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* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Umrechnung verschiedener Modelltiere basierend auf BSA (Wert basierend auf Daten aus FDA Draft Guidelines)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
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0.025
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0.02
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0.007
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Km factor
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20
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20
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12
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12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Um beispielsweise die Resveratrol-Dosis für eine Maus (22,4 mg/kg) auf eine Dosis basierend auf dem BSA für eine Ratte zu ändern, multiplizieren Sie 22,4 mg/kg mit dem Km-Faktor für eine Maus und dividieren Sie dann durch den Km-Faktor für eine Ratte. Diese Berechnung ergibt eine Ratten-Äquivalentdosis für Resveratrol von 11,2 mg/kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Chemische Informationen
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Molecular Weight (MW)
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332.4
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Formula
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C20H20N4O
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CAS No.
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1000669-72-6
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Storage
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3 years -20℃Powder
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6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
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Synonyms
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Solubility (25°C) *
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In vitro
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DMSO
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67 mg/mL
(201.56 mM)
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Water
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<1 mg/mL
(
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Ethanol
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67 mg/mL
(201.56 mM)
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In vivo
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0.5% methylcellulose
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30 mg/mL
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* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Chemical Name
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(E)-(4-(2-(1H-indazol-3-yl)vinyl)phenyl)(piperazin-1-yl)methanone
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Molaritätsrechner Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner
Produktgruppe : Angiogenese > Src-Inhibitor
