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Molekulargewicht:
469,41 Ki8751 ist ein potenter und selektiver Inhibitor von VEGFR2 mit einer IC50 von 0,9 nM, >40-fach selektiv für VEGFR2 als c-Kit, PDGFRα und FGFR-2, wenig Aktivität gegenüber EGFR, HGFR und InsR.
Biologische Aktivität Ki8751 hemmt VEGFR2 mit einer IC50 von 0,9 nM potent und selektiv. Ki8751 hemmt auch PDGFRα, c-Kit und FGFR-2 mit viel höheren IC50-Werten (40 nM–170 nM). Abgesehen von diesen mehreren Kinasen stört Ki8751 andere Kinasen, einschließlich HGFR, EGFR und InsulinR, selbst bei 10 μM nicht. In humanen Nabelvenen-Endothelzellen (HUVECs) verringert Ki8751 (1 nM–100 nM) effektiv die VEGF-stimulierte Zellproliferation und die Gefäßpermeabilität. In metastasierten kolorektalen Karzinomzellen (CRC) MIP, RKO, SW620 und SW480, aber nicht in HCT116, erhöht Ki8751 (10 nM) die zelluläre Seneszenz. In Nacktmäusen, die menschliche Tumor-Xenotransplantate von GL07-, St-4-, LC6-, DLD-1- und A375-Zellen tragen, hemmt Ki8751 (20 mg/kg) das Tumorwachstum. In Nacktratten-Xenotransplantatmodellen von LC-6-Zellen hemmt Ki8751 (5 mg/kg) das Tumorwachstum vollständig, ohne das Körpergewicht zu beeinflussen.
Zelluläre Kinase-Assays NIH3T3-Zellen, hergestellt durch Transfektion von humanem KDR. Die Zellen werden in einer mit Kollagen Typ I beschichteten 96-Well-Platte in einer Menge von 1,5 × 10 4 pro Well kultiviert. Das Medium wird dann durch ein DMEM-Medium mit 0,1% FCS ersetzt. In DMSO verdünntes Ki8751 wird in jede Vertiefung gegeben und kultiviert. rhVEGF wird bis zu einer Endkonzentration von 100 ng/ml zugegeben und die Zellstimulation bei 37 °C durchgeführt. Die Zellen werden mit PBS (pH 7,4) gewaschen, 50 µl Solubilisierungspuffer (20 mM HEPES (pH 7,4)), 150 mM NaCl, 0,2 % Triton X-100, 10 % Glycerin, 5 mM Na3VO4, 5 mM Dinatriumethylendiamintetraacetat , und 2 mM Na4P2O7) wird dann zugegeben und ein Zellextrakt wird hergestellt. Getrennt davon wird PBS (50 &mgr;l, pH 7,4) mit 5 &mgr;g/ml Antiphosphotyrosin-Antikörper (PY20) zu einer Mikroplatte für ELISA gegeben. Nach dem Waschen der Platte werden 300 µL einer Blockierungslösung zugegeben. Der Zellextrakt wird auf die Platte übertragen. Ein Anti-VEGFR2-Antikörper und ein Peroxidase-markierter Anti-Kaninchen-Ig-Antikörper werden zugegeben. Als nächstes wird ein chromophores Substrat für Peroxidase zugegeben und die Extinktion bei 450 nm mit einem Mikroplatten-Lesegerät gemessen. Die VEGFR2-Phosphorylierungsaktivität für jede Vertiefung wird bestimmt, indem angenommen wird, dass die Extinktion mit Zugabe von VEGF und ohne Zugabe der Testprobe 100% VEGFR2-Phosphorylierungsaktivität und VEGF 0% VEGFR2-Phosphorylierungsaktivität ist. Die Konzentration der Hemmung (%) der VEGFR2-Phosphorylierung wird für jeden Fall bestimmt und der IC50-Wert wird berechnet.
Methode Um die Hemmung der VEGF-stimulierten HUVEC-Proliferation durch Ki8751 zu bewerten, werden HUVECs mit einer Dichte von 4000 Zellen/200 µl/Well in mit Kollagen Typ I vorbeschichteten 96-Well-Platten ausplattiert. Nach 24 Stunden werden die Zellen 1 Stunde mit Ki8751 inkubiert und dann mit 20 ng/ml rhVEGF stimuliert. Die Kulturen werden 72 Stunden bei 37 °C inkubiert, dann mit 1 μCi/Well [3H]Thymidin gepulst und 14 Stunden erneut inkubiert. Die Zellen werden auf den Einbau von Tritium unter Verwendung eines Beta-Zählers untersucht.
Produktgruppe : Protein Tyrosinkinase > VEGFR-Inhibitor
