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Molekulargewicht:
198,22 Splitomicin ist ein selektiver NAD(+)-abhängiger Histon-Deacetylase-Sir2p-Inhibitor mit einem IC50 von 60 μM, der in einem zellbasierten Assay eine höhere Aktivität zeigt.
Biologische Aktivität Splitomicin hemmt die Sir2p-Deacetylase-Aktivität, indem es den Zugang zur acetylierten Histon-Bindungstasche verändert oder blockiert. Splitomicin hemmt die durch Thrombin, Kollagen, AA und U46619 induzierte Thrombozytenaggregation durch Hemmung der cyclischen AMP-Phosphodiesterase-Aktivität und anschließender Hemmung der intrazellulären Ca(++)-Mobilisierung, TXB2-Bildung und ATP-Freisetzung. In einem Mausmodell mit photochemischer Verletzung erhöht Splitomicin (80 mg/kg/d ip) die Gewebefaktoraktivität in der Arteriengefäßwand und fördert die Bildung von Thrombus der Halsschlagader. HDA-Assay Histon H4 wird unter Verwendung des HDAC-Assay-Kits chemisch acetyliert. Der Ganzzellextrakt wird aus einem hst2'-Stamm hergestellt, der 2 µ-Plasmid mit Galactose-induzierbarem Wildtyp-SIR2 (pAR14), mutiertem SIR2 (GAL-SIR2-Y298N oder GAL-SIR2-H286Q) oder leerem Vektor enthält. Für Histon-Deacetylase-Assays werden 50 μg Hefe-Ganzzellproteinextrakt mit [3H]-acetyliertem Histon-H4-Peptid (40.000 cpm) mit oder ohne 500 μM NAD+ in einer 100-μl-Reaktion inkubiert. Der Puffer enthielt 150 mM NaCl, 25 mM Natriumphosphat, pH 7,4 und 1 mM DTT. Die Reaktionen werden 16 h bei 30 °C inkubiert und durch Zugabe von 25 μL 1 N HCl und 0,15 N Essigsäure gestoppt. Freigesetztes [3H]-Acetat wird mit 400 µL Ethylacetat extrahiert.
Produktgruppe : Epigenetik > Sirtuin-Inhibitor
