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Molekulargewicht:
521,41 G-749 ist ein neuartiger und potenter FLT3-Inhibitor mit IC50 von 0,4 nM, 0,6 nM und 1 nM für FLT3 (WT), FLT3 (D835Y) und Mer , die eine geringere Wirksamkeit gegenüber anderen Tyrosinkinasen zeigen.
Biologische Aktivität In FLT3-WT-tragenden RS4-11-Zellen und FLT3-ITD-tragenden MV4-11- und Molm-14-Zellen hemmt G-749 stark die Autophosphorylierung von FLT3 mit einer IC50 von ≤8 nM. In Leukämiezellen zeigt G-749 antiproliferative Aktivität, indem es Apoptose induziert. In BaF3-Zelllinien, die FLT3-ITD/N676D, FLT3-ITD/F691L, FLT3-D835Y oder FLT3-D835Y/N676D stabil exprimieren, zeigt G-749 eine starke inhibitorische Aktivität mit IC50 von In MV4-11 Xenograft-Mäusen, G-749 (30 mg/kg po) hemmt effektiv den FLT3-Weg und hemmt signifikant das Tumorwachstum. In einem orthogonalen Modell der Knochenmarktransplantation unter Verwendung von Molm-14-Zellen hemmt G-749 (20 mg/kg po) auch das Tumorwachstum und erhöht das Überleben. Kinase-Assay Aktivitätsassays werden unter Verwendung der zeitaufgelösten Fluoreszenz-Resonanz-Energietransfer-(TR-FRET)-Technologie Lance Ultra von Perkin-Elmer durchgeführt. Kurz gesagt, 10 ng/ml FLT3-Enzym, ein seriell verdünntes G-749, 80 nM Substrat des ULight-Poly-GT-Peptids und variable Mengen ATP (8,5 µM bis 1088 µM) werden in Kinase-Assaypuffer (50 mM HEPES pH 7,5 .) gemischt , 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 2 mM DTT und 0,01 % Tween-20) und werden in einem Volumen von 10 µl zu einer 384-Well OptiPlate-384 gegeben. Kinasereaktionen werden bis zu 1 h bei Raumtemperatur inkubiert und dann durch Zugabe von 5 µl 10 mM EDTA gestoppt. Ein Volumen von 5 ul des spezifischen Eu-markierten Anti-Phosphopeptid-Antikörpers, verdünnt in LANCE-Detektionspuffer, wird dann bis zu einer Endkonzentration von 2 nM zugegeben. Nach 30-minütiger Inkubation werden die Assayplatten bei 23°C inkubiert und das LANCE-Signal wird auf einem EnVision Multilabel Reader gemessen. Die Anregungswellenlänge wird auf 320 nm eingestellt und die Emission bei 615 nm (Donor) und 665 nm (Akzeptor) überwacht. Der IC50 wird mithilfe der nichtlinearen Regressionsanalyse von GradPad Prism 5 berechnet.
Produktgruppe : Protein Tyrosinkinase > FLT3-Inhibitor
