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Molekulargewicht:
374.32 GNF-2 ist ein hochselektiver nicht-ATP kompetitiver Inhibitor von Bcr-Abl, zeigt keine Aktivität gegenüber Flt3-ITD, Tel-PDGFR, TPR-MET und Tel -JAK1 transformierte Tumorzellen.
Biologische Aktivität GNF-2 bewirkt eine dosisabhängige Wachstumshemmung der Bcr-abl-positiven Zelllinien mit IC50-Werten von 273 nM (K562) und 268 nM (SUP-B15). GNF-2 hemmt das Wachstum von Ba/F3.p210E255V- und Ba/F3.p185Y253H-Zellen mit IC50-Werten von 268 nM bzw. 194 nM. GNF-2 (1 μM) induziert die Apoptose von Ba/F3.p210-Zellen sowie Ba/F3.p210E255V-Zellen. GNF-2 hemmt dosisabhängig die zelluläre Tyrosinphosphorylierung von Bcr-abl mit einer IC50 von 267 nM. GNF-2 (1 μM) induziert eine signifikante Abnahme der Phospho-Stat5-Spiegel in Ba/F3.p210-Zellen. GNF-2 bindet an die myristische Bindungstasche von Bcr-abl. GNF-2 hemmt die Kinaseaktivität von nicht-myristoyliertem c-Abl stärker als die von myristoyliertem c-Abl, indem es an die Myristat-bindende Tasche im C-Lobe der Kinasedomäne bindet. GNF-2 (10 μM) benötigt BCR und/oder die c-Abl SH3- und/oder SH2-Domänen, um die BCR-Abl-abhängige Zellproliferation zu hemmen. GNF-2, jedoch kein methyliertes GNF-2-Analogon, bindet c-Abl in Zellextrakten, die von 3T3-Fibroblasten abgeleitet sind. GNF-2 (10 &mgr;M) hemmt in einer dosisabhängigen Weise eindeutig die Tyrosinphosphorylierung von CrkII. GNF-2 hemmt die Phosphorylierung von CrkII in c-AblG2A-exprimierenden Zellen mit einer IC50 von 0,051 µM. GNF-2 bindet in einer erweiterten Konformation in der Myristat-Tasche, wobei die CF3-Gruppe in der gleichen Tiefe wie die letzten beiden Kohlenstoffe des Myristat-Liganden vergraben ist. GNF-2 (10 µM) in Kombination mit Imatinib (1 µM) reduziert die Anzahl resistenter Klone auf 1 µM Imatinib um mindestens 90 %. GNF-2 hemmt die Autophosphorylierung und Proliferation von BafF3-Zellen, die p210Bcr-Abl- und p210Bcr-Abl-Mutanten exprimieren. GNF-2 (8 nM) in Kombination mit GNF-5 (20 nM) führt zu additiven Effekten hinsichtlich der Hemmung der Abl64–515-Kinaseaktivität. Protokoll (nur als Referenz) Kinase-Assay: [2]
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Binding assay
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Recombinant proteins (100 nM for each construct) or immunoprecipitated proteins are diluted in kinase buffer (20 mM HEPES (pH 7.4), 50 mM KCl, 0.1% CHAPS, 30 mM MgCl2, 2 mM MnCl2, 1 mM DTT, and 1% glycerol). Aliquots of the diluted proteins are preincubated with either DMSO or compounds for 30 min at room temperature and then added to K-LISA PTK EAY reaction plates. The kinase reaction is initiated by adding 0.1 mM ATP and is allowed to proceed for 30 min at room temperature. The phosphorylation of GST-Abltide is monitored by SDS-PAGE and phosphorimaging analysis or autoradiography.
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Zellassay: [1]
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Cell lines
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Ba/F3.p210, Ba/F3.p210E255V and Ba/F3.p185Y253H cells
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Concentrations
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~10 μM
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Incubation Time
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48 hours
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Method
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Cells (0.3-0.6 × 106 per mL) are plated in duplicate or triplicate in 96-well plates containing increasing GNF-2 concentrations (5 nM–10 μM). After incubation at 37 ℃ in 5% CO2 for 48 hours, the effect of GNF-2 on cell viability is determined by the MTT colorimetric dye reduction method. Inhibition of cell proliferation is calculated as a percentage of growth of DMSO-treated cells, and IC50 values are determined with Microsoft Excel XLfit3.
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Umrechnung verschiedener Modelltiere basierend auf BSA (Wert basierend auf Daten aus FDA Draft Guidelines)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
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0.025
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0.02
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0.007
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Km factor
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20
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20
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12
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12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Um beispielsweise die Resveratrol-Dosis für eine Maus (22,4 mg/kg) auf eine Dosis basierend auf dem BSA für eine Ratte zu ändern, multiplizieren Sie 22,4 mg/kg mit dem Km-Faktor für eine Maus und dividieren Sie dann durch den Km-Faktor für eine Ratte. Diese Berechnung ergibt eine Ratten-Äquivalentdosis für Resveratrol von 11,2 mg/kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Chemische Informationen
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Molecular Weight (MW)
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374.32
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Formula
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C18H13F3N4O2
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CAS No.
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778270-11-4
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Storage
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3 years -20℃Powder
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6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
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Synonyms
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Solubility (25°C) *
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In vitro
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DMSO
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74 mg/mL
(197.69 mM)
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Water
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<1 mg/mL
(
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Ethanol
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<1 mg/mL
(
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* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Chemical Name
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Benzamide, 3-[6-[[4-(trifluoromethoxy)phenyl]amino]-4-pyrimidinyl]-
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Molaritätsrechner Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner
Produktgruppe : Angiogenese > Bcr-Abl-Inhibitor
